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荔枝(LitchichinensisSonn.)和龙眼(DimocarpuslonganLour.)是我国南方的重要经济果树,但其选育种研究水平相对落后于其它大宗果树。本论文在前人基础上,采用RAPD等多种分子标记技术,对荔枝2个重要性状的相关分子标记进行了分析,并开展了龙眼分子遗传图谱的构建研究,主要研究结果如下:
l、分析了6个与荔枝成熟期密切相关的RAPD标记,通过克隆测序,成功地把其中两个标记转化成SCAR标记,即:与荔枝早熟性状密切相关的SC-Em-J06-1360标记和与荔枝迟熟性状密切相关的SC-Lm-Y03—1912标记。这两个SCAR标记的获得,可有效应用于荔枝成熟期性状的早期鉴别,加快荔枝杂交育种工作中杂种选择的进程。
2、采用自购的试剂,在荔枝上建立了节省型AFLP分析体系。对比AFLP专用试剂盒,该体系降低了54%的实验成本;对银染方法进行了改进,在获得清晰的电泳图谱的前提下,大幅度缩短了AFLP银染所需时间,由原来的90分钟缩短为40分钟。
3、在建立了荔枝AFLP体系的基础上,利用各由8个单株组成的长、短童期基因池,筛选了32对选择性扩增引物,得到805个扩增位点,其中73个表现多态性。进一步利用这些多态性位点对小集群进行共分离分析,初步筛选出可能与童期性状有连锁关系的特异片段23条,其中E4/M4-259与短童期性状的连锁程度最高,为20.OcM
4、利用广东主栽龙眼品种石硖和迟熟果大的中秋一号龙眼作为亲本进行正反交,分别获得种子4lO和675粒,创建了两个大数量的Fl杂种群体。至论文答辩时,两个群体的苗龄为¨个月。已进行真假杂种鉴别和分子标记分离情况观察,初步确定该群体具有重要的基础研究和选育种价值。
5、利用合作单位创建的另一个作图群体“凤梨朵×大乌圆”F1代,选择其中的94个单株进行图谱构建研究,通过1040个RAPD引物对双亲进行多态性分析,筛选出120个多态性引物,挑选其中76个进行分子遗传图谱构建。这76个引物共产生119个多态性标记,其中父本53个,母本39个,共有位点25个。采用JoinMapR3.0和MapDisto1.5.3a11作图软件进行连锁分析,得到大乌圆(父本)和风梨朵(母本)的分子遗传图谱各两幅。JoinMapR3.0构建的图谱质量相对较高,获得大乌圆和风梨朵分子遗传图谱的框架图。其中父本大乌圆的分子遗传图谱具体数据为51个分离位点形成15个连锁群,覆盖总图距344.3cM,位点之间平均距离为6.75cM;连锁群的平均长度为23cM,每个连锁群平均包含3.4个位点。母本凤梨朵的分子遗传图谱具体数据为43个位点形成¨个连锁群,覆盖总图距331.5cM,位点之间的平均遗传距离为7.71cM;连锁群的平均长度为30.1cM,每个连锁群平均包含3.9个位点。