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目的:第一部分:观察手动与自动两种切片方法和组织种类对实测切片厚度的影响,为组织、细胞的形态结构和化学物质的定位与定性观察及定量分析结果的评价提供参考。第二部分:(1)应用细胞学检查、病理学诊断、细胞核DNA倍体分析和第二代杂交捕获试验方法检测HPV-DNA,并进行对比分析,为临床早期筛查宫颈癌及癌前病变提供一种快速而有效的辅助诊断的方法。(2)有助于筛查出细胞学诊断不明确病例中有恶变潜能的风险人群,并为宫颈癌及癌前病变发展方向的预测、治疗效果及病变预后的评估提供更多有价值的肿瘤生物学信息。方法:第一部分:选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝、胰腺、胃及肺4种组织,各组织单独包埋制成蜡块,预设电动切片机的切片厚度刻度值为3、5、7、10μm,分别作自动和手动两种方法切片,所获得的薄组织片经二次包埋、切片、HE染色,TIGER图像分析仪测量切片的实际厚度。第二部分:对进行常规宫颈脱落细胞学普查的370例妇女,用宫颈刷取材,液基薄层制片备用。涂片分两组进行实验:其中一组采用巴氏法染色做常规细胞学检查;另一组经改良Feulgen法染色,进行细胞核DNA含量测量与倍体分析。对常规细胞学检查有异常的病例进行病理组织学检查。对检测到感染了高危型人乳头瘤状病毒(HR-HPV)的病例,将其检查结果与DNA倍体分析结果结合宫颈病变级别与年龄因素进行分析比较。结果:第一部分:(1)手动和自动切片对组织切片的实测厚度有影响,组织种类对组织切片的实测厚度无影响。(2)各组织切片的厚度测量均值均较切片机预设厚度值大,同一切片机预设厚度值条件下,自动切片的实测厚度均值均小于手动切片,且更接近切片机预设刻度值。(3)无论手动或是自动切片的实测厚度均随着切片机预设切片厚度的增大而呈正比增加,其相关系数r均大于0.9830。(4)自动和手动切片的实测厚度分别比切片机预设切片厚度要厚29-50%和48-91%,自动切片与手动切片的切片厚度均值相差25%,二者相对误差为61%。(5)相同组织的组织切片实测厚度的极端离散趋势(极差)随切片机预设厚度值的增加而呈现上升趋势,且手动切片组的极差大于自动切片组。第二部分:(1) 370例受诊者经常规宫颈细胞学检查发现其中有362例(97.7%)异常:包括ASCUS 140例,占患病总数的37.8%;LSIL 190例,占51.4%;HSIL 31例,占8.4%;病理医生镜下观察诊断为:CINⅠ179例,占总患病例的48.4%;CINⅡ49例,占13.2%;经DNA倍体分析,370例样本其中258例(69.7%)为异常。以病理诊断结果为金标准,细胞核DNA倍体分析筛查CINⅡ以上宫颈病变的灵敏度为98.6%,而常规细胞学方法则为72.2%。(2) 370例患者中有191例进行了HPV检测,其中有高危型HPV(HR-HPV)感染81例,将HPV检查结果与DNA倍体分析结果结合宫颈病变级别作分析比较,二者阳性检出率均与宫颈病变的程度呈正相关;大部分感染病例能检测到非整倍体。(3) 191例有HPV检测结果的病例,以病理诊断结果为金标准计算,细胞核DNA倍体分析筛查CINⅡ以上宫颈病变的灵敏度为84.4%,而HR-HPV检测方法则为75.6%。(4)不同年龄组间的高危型HPV检出率明显有差异,年轻组高于中老年组。而非整倍体的检出结果不受患者年龄因素的影响。(5)细胞学诊断不明确的ASCUS病例,感染了HR-HPV且有异倍体的患者中,≥CINⅡ的检出率最高,未感染HR-HPV且未能检出异倍体患者中,无一例CINⅠ以上的病例。结论:第一部分:自动切片与手动切片的切片厚度相差25%,二者相对误差为61%,自动切片获得的组织切片的厚度精度较高,优于手动切片。第二部分:(1)宫颈脱落细胞DNA倍体分析较细胞学检查用于宫颈疾病筛查时灵敏度更高,细胞学检查结合DNA倍体分析是癌前病变和宫颈癌筛查的有效方法。(2) HR-HPV感染率提高以及年轻患者HR-HPV感染阳性率较中老年高,是宫颈癌年轻化的两个重要因素。(3) DNA异倍体检测结果在宫颈癌的不同发病年龄之间无差别,而HR-HPV阳性率在不同年龄之间有差别,所有HR-HPV感染病例中发现大部分有异倍体,而有异倍体病例中仅部分有HR-HPV感染。DNA倍体分析法较HR-HPV检测法灵敏度更高。(4) HR-HPV感染随着细胞学或病理学检测宫颈病变级别的增高而增高。(5)应用病理学检查、HR-HPV检查、细胞核DNA倍体分析三联法,为细胞学诊断不明确的ASCUS病例的鉴别及确诊提供参考,感染了HR-HPVH有异倍体的患者中,≥CINⅡ的检出率最高,未感染HR-HPV且未能检出异倍体患者中,无一例CINⅠ以上的病例。