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目的:通过比较不同频率(2Hz,100Hz)电针对坐骨神经钳夹损伤大鼠的实验观察,以“Bcl-2”“P53”“Bax”作为检测指标,揭示电针治疗坐骨神经损伤抗凋亡作用的机制,探求周围神经损伤后抑制神经元凋亡的最佳治疗频率。材料与方法:参考钳夹法制作模型。选用SPF级SD大鼠48只,体重250g-350g,7-9周,雌雄各半。采用随机数字表分配法分为四组:空白组、模型组、治疗组1(2Hz)、治疗组2(100Hz),每组各12只。空白组:正常饲养,将动物固定在自制的塑料筒内,鼠尾和两后肢露在筒外固定,持续15min,不做任何治疗。模型组:造模成功后,将动物固定在自制的塑料筒内,鼠尾和两后肢露在筒外固定,持续15min,不做任何治疗。治疗组1:造模成功后,于造模第8天深刺“环跳”穴。连接电针仪进行治疗,另一端制成无关电极,选用频率为2Hz的连续波,电针治疗强度以针刺部位局部轻微抽动为准,每次治疗15min,1次/天,连续治疗14天。治疗组2频率为100Hz,除频率与治疗组1不同外,其余予相同处置。各组在造模第8天、22天进行足底印迹检查。取损伤处坐骨神经钳夹处约上下2mm的坐骨神经及同侧L4-L5节段脊髓,用来制作成切片,通过HE染色,Western blot免疫组化等方法测定神经细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、P53及Bax的表达。结果:1.一般状态观察摄食饮水及大小便正常,造模后无感染;除空白组其余各组呈现拖趾状或蹦跳状步态,各组间差异不明显。治疗组1和治疗组2在造模第15天步态开始恢复。2.坐骨神经功能指数(SFI)测定治疗组与模型组相比SFI值升高(P<0.01),且治疗组1优于治疗组2(P<0.01)。3.HE染色模型组神经纤维排列呈不规则、紊乱的形式,且神经纤维周围的雪旺细胞增加,轴突和髓鞘发生裂解,几乎完全消失。治疗组神经纤维病理变化较轻,神经纤维出现新的生长,两者对比治疗组1较轻。4.Western blot定性、定量检测4.1 Western blot Bcl-2检测结果:四组实验中bcl-2蛋白均有明显条带,测定灰度值,(1)与空白组比较,模型组、治疗组1、治疗组2中bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.01);(2)与模型组相比,治疗组1和治疗组2中bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.01);(3)与治疗组1相比,治疗组2中bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。4.2 Western blot Bax检测结果:四组实验中Bax蛋白均有明显条带,测定的灰度值,(1)与空白组相比,模型组和治疗组2中Bax蛋白表达明显升高(P<0.01),治疗组1中Bax蛋白表达升高(P<0.05);(2)与模型组相比,治疗组1和治疗组2中Bax表达明显降低(P<0.01);(3)与治疗组1相比,治疗组2中Bax表达升高(P<0.05)。4.3 Western blot P53检测结果:四组实验中P53均有明显条带,测定的灰度值,(1)与空白组相比,模型组和治疗组2中P53蛋白表达明显升高(P<0.01),治疗组1中P53蛋白表达升高(P<0.05);(2)与模型组相比,治疗组1和治疗组2中P53蛋白表达明显降低(P<0.01);(3)与治疗组1相比,治疗组2中P53蛋白表达升高(P<0.05)。5.免疫组织化检测结果5.1 Bcl-2免疫组织化检测结果:四组实验中bcl-2蛋白均有表达,(1)与空白组相比,模型组中bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),治疗组1与治疗组2中bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.01);(2)与模型组相比,治疗组1中bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.01),治疗组2中bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);(3)与治疗组1相比,治疗组2中bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。5.2 Bax免疫组织化检测结果:四组实验中Bax蛋白均有表达,(1)与空白相比,模型组和治疗组2中Bax蛋白表达明显升高(P<0.01),治疗组1中Bax表达均升高(P<0.05);(2)与模型组相比,治疗组1和治疗组2中Bax蛋白表达明显降低(P<0.01);(3)与治疗组1相比,治疗组2中Bax蛋白表达升高(P<0.05)。5.3 P53免疫组织化检测结果:四组实验中P53均有表达,(1)与空白组相比,模型组和治疗组2中P53表达明显升高(P<0.01),治疗组1中P53表达升高(P<0.05);(2)与模型组相比,治疗组1和治疗组2中P53表达明显降低(P<0.01);(3)与治疗组1相比,治疗组2中P53表达升高(P<0.05)。结论:1.电针可以改善急性坐骨神经损伤大鼠坐骨神经运动功能的恢复,且2Hz组优于100Hz组。2.电针可调节急性坐骨神经钳夹损伤后脊髓前角细胞运动神经元凋亡及相关蛋白Bcl-2、bax及p53的表达,机制可能与增强抗凋亡作用因子Bcl-2,降低促凋亡因子Bax、P53的表达有关。3.电针可调节急性坐骨神经钳夹损伤后脊髓前角细胞运动神经元凋亡及相关蛋白Bcl-2、bax及p53的表达,频率2Hz优于100Hz。