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目的: 本研究通过免疫组织化学、Western blot、荧光定量PCR技术检测乳腺导管上皮不典型增生(ADH)、导管内癌(DCIS)和浸润性导管癌(IDC)三组病变组织中PTEN基因在mRNA以及蛋白水平的表达情况,并对临床病理随访资料进行相关性分析,旨在探讨以下问题: 1.探讨PTEN在ADH、DCIS、IDC三组病变组织中的表达及其在乳腺癌发生发展过程中的意义。 2.分析 PTEN的表达与乳腺癌患者发病年龄、病理学分级、肿瘤直径、是否存在淋巴结转移以及临床分期的关系。 3.探讨 PTEN表达与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、原癌基因(HER-2)、p53、EGFR、K i-67的关系。 材料与方法: 1、收集2001年1月至2013年12月广东省妇幼保健院乳腺防治中心行手术治疗并经病理确诊的病例,其中导管上皮不典型增生60例,导管内癌100例,浸润性导管癌165例,采用免疫组织化学技术(IHC)检测(S-P法)各组乳腺病变中PTEN蛋白的表达情况。 2、利用Western blot方法进一步检测ADH、DCIS、IDC三组乳腺病变组织中PTEN蛋白的表达情况,进而与免疫组化结果相互印证。 3、利用real-time RT-PCR检测ADH、DCIS、IDC三组乳腺病变组织中PTEN基因在mRNA水平的表达情况; 4、分析PTEN蛋白表达水平与乳腺癌患者年龄、肿瘤直径及分化程度以及转移之间的相关性; 5、分析 P TEN表达与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、原癌基因(HER-2)、p53、EGFR、Ki-67的关系。 结果: 1、分别在ADH、DCIS、IDC三组病变组织中运用免疫组化技术检测PTEN的表达,结果显示 PTEN蛋白在三组病变组织中的阳性表达率分别为91.9%、48.9%、36.9%,呈逐渐下降趋势,三组间PTEN蛋白的表达差异有统计学意义(?2=54.734,P<0.001)。 2、用Western-Blot技术检测PTEN蛋白在乳腺ADH、DCIS、IDC三组病变组织中的表达情况,结果显示PTEN蛋白在ADH组表达最高,DCIS组次之, IDC组最低,PTEN蛋白从ADH、DCIS、IDC三组病变组织中的表达逐级递减趋势,三组病变组织间PTEN蛋白表达差异有统计学意义(?=9.355,P<0.001)。 3、用real-time RT-PCR技术检测ADH、DCIS、IDC三组乳腺病变组织中PTEN基因在mRNA水平的表达情况,结果显示,ADH组PTEN mRNA表达水平最高,DCIS组次之,IDC组最低。PTEN mRNA在ADH、DCIS、IDC三组病变组织中的表达逐级递减趋势(?=26.661,P<0.001),与其在蛋白水平的表达趋势相一致。 4、通过免疫组化结果与患者临床资料进行相关性分析显示,年龄与PTEN蛋白表达水平无相关。PTEN蛋白表达水平与患者的肿瘤分化程度、临床分级相关,且差异有统计学意义(?2=15.8,P<0.001)。 5、PTEN蛋白的表达与ER(?2=31.116,P<0.001)、PR(?2=15.137,P<0.001)、HER-2(?2=12.099,P<0.001)、K i-67(?2=58.409,P<0.001)、P53(?2=9.922, P<0.001)及EGF R(?2=11.188,P<0.001)相关,有统计学意义。 结论 1、无论是在蛋白水平还是 mRNA水平, PTEN基因的表达从(ADH→DCIS→IDC)呈逐级递减趋势,提示PTEN基因可能参与了乳腺癌发生发展的过程,并且可能与其呈负相关。 2、乳腺癌的组织学分级、肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期以及ER、PR、HER-2、Ki-67、P53等多种临床病理学指标均与PTEN蛋白的表达水平相关联,提示联合检测乳腺癌组织中的PTEN蛋白有助于评估乳腺癌的预后。