目的:木鳖子为临床常用中药,具有散结消肿,攻毒疗疮的功效,现临床多用于肿瘤等疾病的辅助治疗。木鳖子生品有毒,含油量丰富,内服需炮制入药,且研究表明,木鳖子炮制后,相对有效成分含量增高,毒性降低,抗肿瘤药效有所增加。但是,木鳖子炮制前后其整体成分变化如何;脂肪油成分发生哪些变化,以及由此变化产生药效差异的机制尚不明确。本研究在课题组前期研究基础上,进一步探究木鳖子炮制前后整体化学成分变化情况;并从脂肪油角度出发,探究木鳖子炮制前后脂肪油成分的具体变化,以及由此变化而产生的药效差异的机制,为木鳖子炮制机理及其抗肿瘤作用机制研究提供一定依据。方法:1.木鳖子炮制前后化学成分定量分析和指纹图谱研究根据课题组前期优化的木鳖子最佳炮制工艺,应用UPLC超高效液相色谱法,对木鳖子炮制前后亚油酸和油酸含量进行测定;建立十批不同产地木鳖子生品及木鳖子霜的特征指纹图谱,结合相似度分析,主成分分析(PCA)和聚类分析等方法,从定量分析和指纹图谱角度,初步明确木鳖子炮制前后整体成分变化情况。2.木鳖子炮制前后脂肪油化学成分变化研究采用正交法优化木鳖子脂肪油的最佳提取工艺,并利用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对提取的木鳖子炮制前后的脂肪油进行成分鉴定分析;结合正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)及变量权重重要性排序(VIP)数据统计分析方法,确定木鳖子炮制前后差异性脂肪油成分。3.木鳖子炮制前后差异性脂肪油成分对肝癌的网络药理学研究借助Pub Chem,Swiss Target Prediction和BATMAN-TCM数据库得到木鳖子炮制前后差异性脂肪油成分靶点相关信息,利用Gene Cards数据库获取肝癌的作用靶点信息,两者交集即为差异性脂肪油成分治疗肝癌的潜在靶点,借助STRING数据库得到靶点的蛋白互作网络,筛选关键靶点,利用DAVID数据库对靶基因进行GO分析与KEGG通路富集分析,并通过Autodock vina软件对成分与关键靶点进行系统分子对接验证。结果:1.木鳖子炮制前后化学成分定量分析和指纹图谱研究木鳖子炮制后其亚油酸和油酸相对含量明显增加,其中亚油酸含量较生品增加了6.97%,油酸含量较生品增加了15.85%;通过中药色谱指纹图谱相似度评价软件,确定了木鳖子炮制前后共20批样品的共有指纹峰为22个,炮制前后样品的指纹图谱相似度有一定差异,其中聚类分析,PCA分析与OPLS-DA分析结果显示,木鳖子生品聚为一类,木鳖子霜聚为一类,说明炮制前后,木鳖子的整体化学成分在质和量上发生了一定的变化。2.木鳖子炮制前后脂肪油化学成分变化研究采用正交法优化了木鳖子脂肪油的提取工艺,其最佳提取工艺为料液比1:40,提取时间为6 h,提取温度为85℃;根据此工艺,对木鳖子炮制前后的脂肪油进行提取,GC-MS检测其成分,共分析鉴定出14种脂肪油成分,其中有11种脂肪油成分在炮制后含量升高,3种成分含量降低;OPLS-DA结果显示木鳖子炮制前后脂肪油成分存在差异,通过VIP分析,共筛选确定8种木鳖子炮制前后脂肪油类差异性成分,包括壬二酸,肉豆蔻酸,棕榈酸,油酸,硬脂酸,亚油酸,10,12-十八碳二烯酸,桐酸。3.木鳖子炮制前后差异性脂肪油成分对肝癌的网络药理学研究根据第二章筛选出的木鳖子炮制前后8种差异性脂肪油成分的结果,利用相关数据库,共得到木鳖子炮制前后8种脂肪油差异性成分548个相关靶点,剔除重复靶点后共得到172个成分靶点,通过与肝癌疾病的1658个相关靶点交集,共得到木鳖子炮制前后差异性脂肪油成分作用于肝癌疾病的靶点共82个,通过PPI蛋白互作,筛选出14个关键的靶点,并通过分子对接,证明了其中亚油酸与油酸能够与MAPK3,MAPK14,PPARG等多个靶点较好地结合,而这些靶点多集中在PPAR信号通路,TNF信号通路,NOD样信号通路,Toll样受体信号通路中,从脂肪油成分角度提示木鳖子炮制前后产生药效差异的机制可能与亚油酸和油酸作用于相关靶点与其对应的通路从而影响疾病的发生发展过程有关。结论:木鳖子炮制前后,亚油酸与油酸成分含量有所增加,指纹图谱存在一定差异,初步证明了木鳖子炮制前后其整体成分存在质与量的差异;此外,木鳖子炮制前后脂肪油成分变化明显,结合网络药理学结果,初步表明了木鳖子炮制前后差异性脂肪油成分能够通过作用于肝癌的相关靶点和对应的通路,影响疾病的发生发展,从而产生药效差异,从脂肪油成分的角度为木鳖子炮制机理和抗肿瘤机制研究提供了一定的依据。