目的：体外循环(ECC)期间许多因素可导致免疫功能的下降，特别是细胞免疫功能的下降。这些因素主要包括神经.内分泌系统对免疫系统的调控失调、ECC时血液直接接触非生理性物质表面、手术创伤、器官缺血再灌注损伤、内毒素释放、输血、低温、麻醉、氧自由基、应激、药物等。单个核细胞在ECC引发的细胞免疫反应过程中发挥着重要的作用。目前关于小儿ECC对单个核细胞的数量、亚群和功能的影响尚未形成系统研究。 本研究希望通过检测小儿围ECC期单个核细胞主要为T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞及自然杀伤(NK)细胞的动态变化，系统探讨小儿ECC前后单个核细胞的变化与发展规律，为临床防治ECC后细胞免疫功能抑制提供检验依据。 方法： 1.病例选择：选择择期于ECC下行室间隔缺损修补术的患儿32例，年龄8月～3岁(平均1.6±0.3岁)；体重7.1～13kg(平均11.3±1.2kg)。 2.麻醉方法：患者入室前给予氯胺酮6mg/kg肌注，麻醉诱导应用芬太尼10μg/kg，咪唑安定0.1mg/kg，维库溴铵0.1 mg/kg，气管插管后复合异氟烷吸入维持麻醉。术中间断追加咪唑安定、芬太尼、维库嗅铵以及吸入异氟烷维持麻醉。主动脉插管前静脉给予肝素3mg/kg。 3.体外循环方法：使用膜式氧合器,Sarns-8000型滚压泵。采用全身浅低温和中度血液稀释，管道预充应用晶体液和胶体液(晶胶比为1:1～1.5)，甘露醇(0.5g/kg)及浓缩红细胞(150～300ml)。灌注流量按照2.2～3.0L/min/m2计算。灌注压力维持在35～65 mmHg左右。ECC结束后以鱼精蛋白1.2～1.5:1中和体内肝素。 4.标本采集：分别于麻醉诱导后(T0)，停ECC即刻(T1)，术后第1天(T2)，术后第3天(T3)及术后第7天(T4)共5个时间点采取静脉血标本。应用流式细胞仪(BD Biosciences)和免疫组织化学染色两种方法进行定量、定位测定CD3+、cD4+、CD8+、CD19+、CD14+、CD16+56+细胞百分率，采用组织化学方法进行核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)染色并在全自动数码显微镜下测定其直径，计算出每个细胞核中AgNORs的个数。 5.数据处理：采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析。所有数据均以均数士标准差(-x±s)表示。不同时点的组内比较采用重复测量数据的方差分析(ANOVA)；应用Pearson分析法进行相关性分析。P<0.05为差异有统计学意义，P<0.01为有显著差异。 结果： 1.ECC时间41～62min，平均为53.5±12.60min;主动脉阻断时间21～39min，平均为30.3±10.7min，所有病例均痊愈出院。 2.CD3+细胞百分数变化情况：与麻醉诱导后(值为57.87±3.28)比较，停ECC即刻及术后1天、3天均显著降低，术后1天降到最低值43.98±4.53，术后3天回升，术后7天恢复至麻醉诱导后水平。 3.CD4+细胞百分数变化情况：与麻醉诱导后(值为35.96±2.12)比较，停ECC即刻降低，术后1、3天均显著降低，术后1天降到最低值26.89±3.42，术后3天回升，术后7天恢复至麻醉诱导后水平。 4.CD8+细胞百分数变化情况：与麻醉诱导后(值为20.91±1.20)比较，停ECC即刻及术后1、3、7天均无显著变化。 5.CD4+/CD8+比值变化情况：与麻醉诱导后(值为1.72±0.03)比较，术后1天显著降低至1.34±0.29，术后3到7天恢复到麻醉诱导后水平。 6.CD19+细胞百分数变化情况：与麻醉诱导后(值为15.99±1.17)比较，停ECC即刻下降至14.08±1.89，术后1到7天恢复到麻醉诱导后水平。 7.CD14+细胞百分数变化情况：与麻醉诱导后(值为9.47±0.43)比较，停ECC即刻显著下降至8.36±1.26，术后1到3天恢复到麻醉诱导后水平，术后7天增高至10.19±0.99)。 8.CD16+56+细胞百分数变化情况：与麻醉诱导后(值为11.90±0.79)比较，停ECC即刻、术后1天均显著升高，术后1天升到13.17±2.48，术后3到7天恢复到麻醉诱导后水平()。 9.免疫细胞化学染色证实CD3、CD4、CD8抗原表达均在相应细胞的细胞膜上，CD3+百分率与流式细胞仪检测结果呈弱正相关(相关系数r=0.492)，CD4+、CD8+细胞百分率与流式细胞仪检测结果呈强正相关(相关系数r分别为0.911，0.991)。 10.AgNORs变化情况：形态类型为单一型，大都呈规则的圆形，ECC前后形态无变化:AgNORs的数量分别为：麻醉诱导后1.62±0.57个/细胞核，停ECC即刻1.58±0.46个/细胞核，术后1天1.50±0.51个/细胞核，术后3天1.55±0.54个/细胞核，术后7天1.67±0.65个/细胞核，ECC前后的数量AgNORs变化不明显。 结论： 1.小儿ECC后T淋巴细胞、B淋巴细胞及单核细胞的数量减少是细胞免疫功能受抑制的主要因素。其中T淋巴细胞的变化可能是最重要的，其亚型CD4+/CD8+比值有可能作为评价细胞免疫功能受抑制的重要指标之一。 2.小儿ECC后虽然B淋巴细胞、单核细胞恢复较快，但T淋巴细胞恢复较慢，可能是病毒、细菌和/或寄生虫感染的高危因素。 3.流式细胞仪和免疫组织化学染色均可对T淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+细胞百分率进行较好检测，二种方法的结果呈正相关。 4.ECC均未对小儿各种单个核免疫细胞(T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞及NK细胞)的增殖功能造成影响，不会抑制增殖功能，也不引起过度增生和恶变。