【摘 要】
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在全基因组序列的测定和基因注释完成后,从基因组水平鉴定每一个基因的功能,以其基因间相互作用、调控关系是功能基因组学研究的主要任务。本工作以野油菜黄单胞菌野油菜致病变种为材料,在全基因组序列和突变体库的基础上,对该菌胞嘧啶脱氨酶注释基因进行了功能鉴定,旨在探讨胞嘧啶脱氨酶基因与该菌致病性、逆境适应性的关系。胞嘧啶脱氨酶催化胞嘧啶脱氨形成尿嘧啶和氨,是嘧啶补偿途径中的关键酶,对一些动物病原细菌的致病性
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在全基因组序列的测定和基因注释完成后,从基因组水平鉴定每一个基因的功能,以其基因间相互作用、调控关系是功能基因组学研究的主要任务。本工作以野油菜黄单胞菌野油菜致病变种为材料,在全基因组序列和突变体库的基础上,对该菌胞嘧啶脱氨酶注释基因进行了功能鉴定,旨在探讨胞嘧啶脱氨酶基因与该菌致病性、逆境适应性的关系。胞嘧啶脱氨酶催化胞嘧啶脱氨形成尿嘧啶和氨,是嘧啶补偿途径中的关键酶,对一些动物病原细菌的致病性至关重要。胞嘧啶脱氨酶广泛存在于细菌、真菌中,而高等动物和植物缺乏胞嘧啶脱氨酶,提示胞嘧啶脱氨酶可作为病原细菌的潜在药物靶标。另外,胞嘧啶脱氨酶催化5—氟胞嘧啶脱氨形成5—氟尿嘧啶和氨,而5—氟尿嘧啶对细菌是致命毒性的。因此,胞嘧啶脱氨酶作为条件致死的选择标记已广泛运用于植物转基因、肿瘤基因治疗、抗菌药物设计和基因调控元、信号传导途径研究中。在野油菜黄单胞菌8004菌株的基因组中,基因注释了一个大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因的同源基因,基因序号为XC0670。并通过BLASTP和SMART分析发现XC1949和XC3413编码的蛋白都具有核苷脱氨酶结构域。本工作利用突变技术和基因表达技术对这三个基因进行的功能鉴定。缺失突变体表型分析结果表明,XC0670、XC1949、XC3413的突变体在完全培养基、基本培养基、各氮源中的生长、HR反应、胞外酶、胞外多糖产量与野生型基本一致,提示这三个基因的突变不影响野油菜黄单胞菌的基本代谢。脱氨酶功能分析表明,XC0670、XC1949、XC3413的各个突变体与野生型一样在含5—氟胞嘧啶的MMX培养基上不能生长,在以胞嘧啶为唯一氮原的NNM培养基上都能生长,而含有XC0670、XC1949、XC3413表达构建的大肠杆菌在含5—氟胞嘧啶的LA培养基上都能正常生长。同时,基因表达分析显示,GUS活性检测这三个基因都不受胞嘧啶诱导。研究结果表明这三个基因都不具有胞嘧啶脱氨酶活性。致病性实验表明,XC1949突变体导致的病斑平均长度为7.8 mm,显著低于8004的病斑平均长度13 mm。而XC0670突变体、XC3413突变体病斑分别为12.8 mm和13.1mm,与8004的病斑长度无显著差异。提示XC1949可能与野油菜黄单胞菌致病性相关,而XC0670、XC3413与致病无关。XC1949与野油菜黄单胞菌致病性的关系仍待进一步研究。
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