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目的： 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。在中国，乳腺癌相关死亡原因排在肿瘤死亡原因的第六位。乳腺癌不仅受遗传因素影响，当今社会快节奏高压力的生存模式也在一定程度上提高了乳腺癌的发病率。中国乳腺癌发病率较发达国家低，但从1990年起乳腺癌以2倍于全球乳腺癌发病率的速度发展，其中城市乳腺癌发病率的提高更为显著。预计到2021年中国乳腺癌患者病例数将达到25万之众。蛋白质酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatases，PTPs)与蛋白质酪氨酸磷酸激酶(protein tyrosine kinases，PTKs)相互拮抗，共同调节细胞内磷酸化的平衡。细胞的磷酸化水平影响着细胞的生长、分化、黏附、迁移和有丝分裂等。因此细胞的磷酸化失衡对肿瘤的发生发展发挥了重要的作用。 蛋白质酪氨酸磷酸酶非受体型12(protein tyrosine phosphatase nonreceptor type12，PTPN12)是PTPs家族中的一员，由PTPN12基因编码，位于7q11.23。研究发现，PTPN12是乳腺癌抑癌因子;其表达水平与乳腺癌预后相关。PTPN12调控细胞有丝分裂，影响细胞骨架结构参与细胞迁移、侵袭的调控，PTPN12还可介导T细胞活性发挥免疫调节作用。PTPN12存在重要的肿瘤靶向治疗价值而成为研究热点。 乳腺癌新辅助化疗的发展应用已有数十年的历史，具有缩小肿物大小、降低分期、早期明确肿物的生物学特点、药物敏感性，为更多的乳腺癌患者提供接受保乳手术的机会的优势。乳腺癌新辅助化疗的应用已经不再局限于局部晚期乳腺癌患者。乳腺癌患者接受辅助化疗与新辅助化疗预后无明显差异，但新辅助化疗却可以为为患者提供如此多的好处，因而越来越多的得到临床医生和研究者的关注。 本研究探讨PTPN12作为乳腺癌新辅助化疗疗效预测因子的价值;探讨PTPN12与乳腺癌预后的相关性;探讨PTPN12对乳腺癌细胞增殖迁移能力的影响。为乳腺癌的发生发展的分子机制提供理论依据。 方法： 一、验证PTPN12在乳腺组织中的表达 1、免疫组化实验分析PTPN12在乳腺癌组织中的蛋白表达情况; 2、Western blot实验分析PTPN12在乳腺癌组织及癌旁组织中的蛋白表达情况。 二、PTPN12表达与临床相关性的分析 1、PTPN12蛋白表达水平的临床病理相关因素; 2、PTPN12与乳腺癌新辅助化疗疗效相关性分析; 3、PTPN12与乳腺癌患者预后相关性分析。 三、验证PTPN12对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响 1、克隆形成实验、MTT实验检测PTPN12对肿瘤细胞增殖的影响; 2、Transwell实验检测PTPN12对肿瘤细胞迁移的影响; 3、免疫共沉淀与蛋白质质谱分析PTPN12相关的细胞生物学信息。 结果： 一、乳腺癌新辅助化疗患者关于PTPN12的研究 1、PTPN12在乳腺组织中的表达情况 PTPN12在乳腺癌组织中表达，其中58例(50.9％)低表达，56例(49.1％)高表达。 2、PTPN12表达水平与临床病理因素相关性 (1)PTPN12表达水平与cTNM分期(p=0.007)、HER2状态(p=0.033)和分子分型(p=0.033)相关。 (2)cTNM分期是PTPN12表达水平的独立影响因素。 3、新辅助化疗的临床病理缓解与临床病理因素的相关性 (1)临床缓解与HER2(p=0.016)，Ki67(p=0.020)，分子分型(p=0.046)，新辅助化疗方案(p=0.037)，治疗周期(p=0.007)和PTPN12表达水平(p＜0.001)相关。 (2)病理完全缓解与cTNM分期(p=0.01)，Ki67(p=0.040)，新辅助化疗方案(p＜0.001)，PTPN12表达水平(p=0.006)相关。 (3)多因素logistic回归分析发现PTPN12表达水平(p=0.001)、治疗周期(p=0.030)是临床缓解的独立相关因素。新辅助化疗方案(p=0.011)是病理完全缓解的独立相关因素。 4、PTPN12表达与新辅助化疗疗效的相关性 (1)x2检验发现P TPN12与临床缓解相关(p=0.001);Fisher精确检验发现PTPN12与pCR具有统计学意义(p=0.006)。 (2)斯皮尔曼等级相关分析发现PTPN12表达与临床反应相关(p=0.011)。 5、PTPN12在TNBC和Luminal B型乳腺癌与pCR相关性 三阴性乳腺癌和Luminal B型乳腺癌中，PTPN12与pCR具有统计学意义(p=0.036,p=0.033)。 二、乳腺癌辅助治疗患者关于PTPN12的研究 1、PTPN12在乳腺组织中的表达情况 (1)PTPN12在乳腺癌组织中表达，其中213例乳腺组织癌(58.2％)为PTPN12蛋白低表达，153例乳腺癌组织(41.8％)为PTPN12蛋白高表达。 (2)乳腺癌组织中蛋白表达水平低于癌旁组织。 2、PTPN12表达水平与患者临床病理因素相关分析 (1)PTPN12表达水平与患者肿物大小(p＜0.001)、淋巴结转移(p＜0.001)、T分期(p＜0.001)、N分期(p＜0.001)、TNM分期(p＜0.001)、ER水平(p=0.039)、HER2水平(p=0.008)、分子分型(p=0.007)相关。 (2)肿物大小和淋巴结转移情况是PTPN12表达的独立影响因素(p＜0.001;p=0.013) 3、Kaplan-Meier生存分析 (1)总生存(OS)与PTPN12表达水平(p＜0.001)、肿物大小(p＜0.001)、淋巴结转移情况(p＜0.001)、T分期(p＜0.001)、N分期(p＜0.001)、TNM分期(p＜0.001)、ER(p＜0.001)、PR(p＜0.001)、分子分型(p=0.005)相关。 (2)无病生存(DFS)与PTPN12表达水平(p＜0.001)、肿物大小(p＜0.001)、淋巴结转移情况(p＜0.001)、T分期(p＜0.001)、N分期(p＜0.001)、TNM分期(p＜0.001)、分子分型(p=0.044)相关。 (3)PTPN12高表达组总生存平均时间7.79年，高于低表达组的7.46年(p＜0.001)。PTPN12高表达组无病生存平均时间7.70年，远高于低表达组的7.30年(p＜0.001)。 4、COX回归多因素分析乳腺癌患者预后相关因素 (1)PTPN12表达水平(p=0.002)、肿物大小(p=0.004)、淋巴结转移情况(p＜0.001)是乳腺癌患者术后总生存(OS)的独立危险因素。 (2)淋巴结转移(p＜0.001)是乳腺癌患者术后无病生存(DFS)的独立危险因素。 5、不同乳腺癌分子分型与PTPN12相关性的Kaplan-Meier生存分析 (1)LuminalB型、HER2扩增型和三阴性乳腺癌患者PTPN12高表达有总生存获益(p=0.005,p=0.001,p=0.015)。 (2)PTPN12表达水平是HER2扩增型乳腺癌患者总生存的唯一相关因素。 三、PTPN12与乳腺癌细胞功能学相关研究 1、PTPN12与细胞的增殖 (1)克隆形成：PTPN12能够有效抑制HCC-1937和MDA-MB-231细胞的增殖能力(p=0.014;p=0.016)。 (2)MTT：PTPN12能够有效抑制HCC-1937和MDA-MB-231细胞的增殖能力(p=0.035，p=0.046)。 2、PTPN12与细胞迁移 PTPN12能够有效抑制MDA-MB-231细胞的迁移能力(p=0.004)。 3、PTPN12互做蛋白的筛选 蛋白质免疫共沉淀结合蛋白质谱技术分析PTPN12差异互做蛋白104个。 结论： 1、乳腺癌新辅助化疗患者PTPN12表达与cTNM独立相关 2、在TNBC和Luminal B型乳腺癌中PTPN12与pCR相关 3、PTPN12与乳腺癌新辅助化疗疗效独立相关 4、乳腺癌辅助治疗患者PTPN12与肿物大小和淋巴结转移情况独立相关 5、PTPN12与乳腺癌患者预后相关 6、HER2扩增型乳腺癌患者中PTPN12与总生存相关 7、PTPN12能够抑制乳腺癌细胞的增殖。 8、PTPN12能够抑制乳腺癌细胞的迁移。 9、PTPN12可能通过肿瘤免疫反应信号通路发挥抑癌作用。