ADAMTS18是解整合素金属蛋白酶家族(ADAMTSs)成员之一,它在器官发育、生殖、血管新生及凝血,炎症、肿瘤等生理病理过程中,都起着非常重要的调控作用。Adamts18基因的突变和失活与肿瘤发展和转移尤为密切。本课题主要研究Adamts18对黑色素转移的影响及发病机理,为后期黑色素瘤的治疗提供新的理论依据。本论文主要分为四个部分:一通过杂交方式获得C57BL/6纯系Adamts18基因缺陷小鼠将Adamts18基因敲除的C57BL/6/129SV背景的杂合子(HT)小鼠与C57BL/6纯系野生(WT)小鼠回交10代,获得C57BL/6纯系Adamts18 HT小鼠。通过杂交获得实验所需要的野生(WT)小鼠和Adamts18基因缺陷(KO)小鼠。二Adamts18缺失在实验性黑色素瘤转移中的作用研究本实验中的黑色素瘤肺转移模型模拟的是肿瘤转移的最后一个步骤(是肿瘤细胞通过血液循环到肺部,在肺部生长成肿瘤的过程)。我们通过尾静脉注射B16黑色素细胞(每只小鼠注射2×10~5 cells)的方式来探究Adamts18对黑色素瘤肺转移的影响。结果表明:B16黑色素瘤细胞可迁移到肺、脾、肠系膜、心脏和肝脏等多个内脏器官。其中,Adamts18 KO小鼠肺转移更严重,与WT对照组相比有显著性差异(P<0.05)。Adamts18 KO小鼠肺表面的结节数目和单位体积肺组织中结节数目明显高于WT对照组。三ADAMTS18缺失在小鼠肺细胞外基质(ECM)重塑中的作用研究细胞外基质(ECM)微环境在肿瘤生长及扩增过程中起重要作用。ADAMTS18作为一种金属蛋白酶,在ECM重塑中起重要作用。我们检测发现,Adamts18 KO小鼠肺组织层粘连蛋白(LN)表达明显高于WT对照组,而IV型胶原蛋白没有明显改变。由于LN是PI3K-Akt-mTOR-SK6信号通路的关键调节因子,在肿瘤的转移和扩增过程中起着重要的作用,因此我们进一步利用蛋白质印迹法(Western Blot)对PI3K和SK6的表达水平进行了测定。结果表明:与WT对照组相比,磷酸化的PI3K和SK6在Adamts18 KO小鼠肺组织中均显著性激活。四层粘连蛋白(LN)在B16黑色素瘤细胞黏附、延展和趋化的作用研究通过Transwell趋化实验,我们发现迁移到下室的细胞数随着LN的浓度升高而增加。同时LN对B16黑色素瘤细胞延展和黏附作用的实验中,随着LN浓度的升高,其延展和黏附能力也不断增强。因此,ADAMTS 18缺失可促进黑色素瘤的肺转移和生长,与肺组织中层粘连蛋白的重塑密切相关。