目的建立检测类风湿关节炎患者（rheumatoid arthritis,RA）外周血单个核细胞（PBMC）中IL-21RmRNA的套式实时荧光定量PCR（Nested-Real-Time-PCR）的方法,（1）研究IL-21RmRNA在RA PBMC中的表达水平并探讨其临床意义;（2）探讨IL-21RmRNA在RA骨破坏中的作用,进一步揭示RA的发病机制;（3）探讨IL-21RmRNA与RA患者血清中IL-21（interleukin-21）含量及外周血CD4⁺CD25⁺T淋巴细胞数量的相关性;（4）探讨IL-21RmRNA在RA患者中医不同证型中的表达水平及其检测意义。方法根据IL-21RmRNA序列,跨内含子设计外引物,采用套式实时荧光定量PCR方法。首次扩增以增加原始模板浓度,并以减少引物、酶的浓度及循环次数的方法保持扩增片段的特异性,再以首次扩增产物为模板,进行二次PCR扩增作实时荧光定量（Real-Time-PCR）检测,同时以β-actin作内参;以二者比值作为IL-21RmRNA表达水平的指标。同时采用竞争性酶联免疫吸附法（ELISE）测定RA患者血清中IL-21的含量,流式细胞术检测EDTA-K₂抗凝外周血中CD4⁺CD25⁺T淋巴细胞数量。结果PCR扩增片段经测序分析证实为IL-21RmRNA的特异性目的片段。Ct值和模板起始浓度对数值之间具有良好的线性关系;检测最低浓度可达10¹拷贝。ELISA法测RA患者血清中IL-21的含量,相关系数为0.9984。60例RA患者与30例健康人群相比,RA患者组基因IL-21RmRNA表达水平及血清中IL-21含量上调,经统计学分析具有显著差异（P＜0.01）。将RA患者关节功能分级组别作IL-21RmRNA及IL-21表达水平比较;Ⅰ级、Ⅱ级相比两者均无显箸差异（P＞0.05）,Ⅰ级、Ⅱ级分别与Ⅲ级以上相比,差异均显著（P＜0.01）。RA活动期IL-21RmRNA及IL-21水平均较非活动期增高,RA患者经治疗后两者的表达水平均明显下调;治疗前后比较均具有显著差异（P＜0.01）。中医证型之间两两比较均没有显著性差异。将60例RA患者PBMC中IL-21RmRNA的表达水平与血清中IL-21含量及外周血CD4⁺CD25⁺T淋巴细胞数量作Pearson相关分析,IL-21RmRNA表达水平与血清中IL-21的含量显著相关,而与外周血CD4⁺CD25⁺T淋巴细胞数量无相关性。结论RA患者IL-21RmRNA及IL-21的表达水平均显著上调,两者表达水平和RA疾病严重程度有关,检测RA患者PBMC中IL-21RmRNA的表达水平及血清中IL-21的含量可能更有助于了解RA患者的免疫功能,有助于指导RA的治疗;本文建立的检测方法重复性好,敏感且特异,可作为一种常规检测手段应用于临床。