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研究目的本研究旨在探讨具有雌激素活性的补肾中药单体异补骨脂素(isopsoralen,ISR)和蜕皮甾酮(ecdysterone,ECR)对过氧化氢(H2O2)诱导的氧化损伤的人晶状体上皮细胞(human lens epithelia cell,HLEC)的保护作用及机制,并进一步寻求这两种植物雌激素保护氧化损伤的HLEC的线粒体蛋白质组学机制,探明其作用靶点,为临床寻求防治老年性白内障的有效天然药物提供科学的依据。研究方法采用H2O2复制HLEC氧化损伤模型,然后ISR, ECR与HLEC共同孵育,以E2(estradiol)作为阳性对照,进行下列研究：一、采用反转录聚合酶链反应技术(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)分析ISR、ECR对HLEC内SOD、GSH-px,CAT的信使RNA(messager RNA, mRNA)表达的影响,探讨ISR和ECR保护氧化损伤的HLEC的酶学机制。二、采用流式细胞术(flow cytometer,FCM)检测ISR、ECR对HLEC内NF-κB表达的影响,探讨ISR和ECR保护氧化损伤的HLEC的细胞信号转导机制。三、采用透射电子显微镜观察ISR、ECR对氧化损伤的HLEC内线粒体超微结构的影响探讨ISR和ECR保护氧化损伤的HLEC的亚细胞水平的形态结构的变化。四、采用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术检测ISR、ECR对氧化损伤的HLEC内线粒体蛋白质表达谱的影响,寻求ISR和ECR保护氧化损伤的HLEC的线粒体蛋白质组学机制,探明其作用靶点。研究结果一、ISR, ECR对H2O2诱导氧化损伤的HLEC中抗氧化酶基因表达的影响1、SODmRNA表达：H2O2组HLEC中SODmRNA表达下降,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01); E2、ISR组和ECR组的SODmRNA表达显著均高于H202组(P<0.01)。2、GSH-px mRNA表达：H2O2组HLEC中GSH-px mRNA表达下降,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)；E2.ISR组和ECR组的GSH-px mRNA表达显著均高于H2O2组(P<0.01)。3.CATmRNA表达：H2O2组HLEC中CATmRNA表达下降,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)；E2.ISR组和ECR组的CATmRNA表达显著均高于H2O2组(P<0.01)。二.ISR、ECR对H202诱导氧化损伤的HLEC中核因子-κB表达的影响正常HLEC内存在NF-κB的表达；H2O2组HLEC内NF-κB表达明显升高,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)；NF-κB抑制剂PDTC组的HLEC内NF-KB表达明显下降,与H2O2组比较差异有统计学意义(P<0.01)；E2.ISR组和ECR组NF-KB表达则介于正常对照组与H2O2组之间,均低于PDTC组,与H2O2组比较差异均有统计学意义(P<0.01)三、ISR、ECR对H2O2诱导氧化损伤的HLEC中线粒体超微结构的影响正常对照组线粒体聚集,双层膜结构及嵴结构清楚、完整；H2O2组线粒体双层膜结构不完整,嵴结构消失,线粒体出现空泡化；E2组和ISR.ECR组线粒体双层膜结构存在,嵴结构较完整。四.ISR、ECR对H2O2诱导氧化损伤的HLEC中线粒体蛋白质组的影响1、H2O2组在蛋白质芯片中结合的蛋白点有50个,其中质荷比为6532和6809的2个蛋白点的峰值较对照组显著上调(P<0.05),分别为对照组的13.6倍和4.8倍,与对照组之间差异有统计学意义。2、E2组在蛋白质芯片中结合的蛋白点有46个,其中质荷比为6532的蛋白点的峰值较H2O2组显著下调(P<0.05),H2O2组为E2组的2.8倍,差异有统计学意义。3、ISR组和ECR组在蛋白质芯片中结合的蛋白点有各49个；其中质荷比为6532和6809的蛋白点的峰值较H2O2组显著下调(P<0.05),H2O2组分别为ISR组的2.2倍和1.9倍,H2O2组分别为ECR组的3.4倍和2.6倍,差异有统计学意义。研究结论一、补肾中药单体ISR与ECR和E2一样具有雌激素样的作用,能够保护由H202诱导氧化损伤的HLEC,其保护作用是通过提高HLEC中抗氧化酶SOD mRNA.GSH-px mRNA,CAT mRNA表达及下调NF-κB p65表达实现的。二、ISR与ECR对H2O2诱导氧化损伤的HLEC线粒体超微结构均有保护作用。三、质荷比为6532的蛋白点可能是ISR与ECR保护氧化损伤的HLEC的线粒体蛋白质组作用靶点。四、核糖体蛋白S29可能是ISR和ECR保护氧化损伤的HLEC的一个重要的线粒体蛋白质。五、补肾中药单体ISR与ECR对人晶状体上皮细胞和白内障有植物雌激素作用。