转染CX3CR1基因对小鼠骨髓间充质干细胞向Fractalkine趋化能力的影响

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nmcflyl
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目的分离、培养、鉴定小鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs);利用Transwell共培养体系验证转染CX3CR1基因对小鼠MSCs向趋化因子Fractalkine (FKN)趋化能力的影响。方法全骨髓差速贴壁法分离纯化原代小鼠MCSs,体外培养、传代扩增获得稳定传代的小鼠MCSs后以流式细胞术鉴定细胞。将携带有趋化因子受体CX3CR1基因及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的慢病毒(LV-CX3CR1-EGFP)及空载体病毒(LV-CON-EGFP)转染小鼠MCSs细胞,采用RT-PCR法、Western印记法检测目的CX3CR1在各组小鼠MCSs中的表达。荧光显微镜观察在Transwell小室中,不同组小鼠MCSs细胞向趋化因子FKN的迁移情况。结果获得了稳定传代、细胞形态均一、生长状态良好的小鼠MCSs;细胞CD29、CD44、CD34有阳性表达;本课题组构建的慢病毒过表达载体pUbi-MSC-CX3CR1-EGFP能成功转染至小鼠MSC细胞中,在Transwell共培养体系中,用荧光显微镜观察,转染目的基因的小鼠MSCs组向FKN的趋化能力明显强于各对照组(P<0.05,P=0.000)。结论CX3CR1基因的转染能增强小鼠骨髓间充质干细胞对FKN趋化的能力。
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