目的：越来越多的研究发现益生菌不仅通过提高机体的获得性免疫水平增强机体的免疫防御能力,同时也能增强宿主对病原的先天性免疫反应,辅助免疫清除。本实验经口给与新生SD大鼠干酪乳酸杆菌,通过检测新生SD大鼠小肠和脾脏中TLR2和CD206的水平、血液中干酪乳酸杆菌的含量及新生SD大鼠的体重,探讨口服干酪乳酸杆菌对TLR2和CD206的激活作用及其后遗效应,同时观察干酪乳酸杆菌杆菌对新生SD大鼠体重的影响及其安全性。 材料与方法： 1.选取一日龄清洁级SD大鼠64只,饲养于中山大学医学院动物中心无特定病原体(SPF)环境中.对所有新生SD大鼠进行编号,然后进行随机分为实验组和对照组,并剪去实验组小鼠尾尖,两组分别给予不同得处理： 1)实验组：经口予以含干酪乳酸杆菌乳饮品,每只0.1ml/次·天(每ml含1×109CFU/干酪乳酸杆菌),共14天,平时继续正常母鼠喂养。 2)对照组：经口给予等热卡的乳饮品,每只0.1ml/次·天,共14天,平时继续正常母鼠喂养。 2.干酪乳酸杆菌：由广州益力多乳品有限公司提供。 3.处理动物：在实验开始的第1天,7天,14天,21天同一时间点,从两组中各取8只SD大鼠,共16只.称重、全麻后1)收集全血2ml;2)取取2cm*2cm脾脏组织放入多聚甲醛内；3)在距离阑尾10cm处截取2cm长的小肠。 4.血培养：将血液加入到为PH值5.5的细菌培养液内,增菌比值1:10,再放入全自动血液培养箱内7天,然后接种到MRS琼脂固体培养基平皿72小时,观察有无菌落生长。 5.小肠、脾脏免疫荧光染色：将标本脱水、浸蜡后制成蜡块,然后切成厚度为5um的石蜡切片,用1％的胎牛血清蛋白封闭.加入羊抗鼠多克隆CD206抗体(稀释1:50)或鼠抗人单克隆TLR2抗体(稀释1:50)4℃过夜,然后用PBS冲洗2次,再加入带有FITC的兔抗羊抗体(稀释1:32)避光反应45分钟,再用PBS冲洗2次.然后记录放大400倍后30个视野内的阳性细胞数,结果取10个视野内的平均值。 6.统计学分析：实验数据以-X±S表示,所有数据均采用SPSS11.0软件分析,两组的死亡率比较采用x2检验,两样本的均数比较首先进行方差齐性检验,方差齐时采用两样本t检验,方差不齐采用近似t检验,P<0.05为差异有统计学意义。 结果： 1.SD大鼠存活情况：两组大鼠的3周内死亡率差异无统计学意义(P>0.05)。 2.SD大鼠体重的变化：整个实验期间,实验组与对照组SD大鼠随着时间的推移体重不断增长,在同一实验时间点两组大鼠的平均体重相比差异无统计学意义(P>0.05)。 3.血培养结果：实验组和对照组均无干酪乳酸杆菌。 4.小肠TLR2及CD206阳性细胞数目的变化：小肠中TLR2及CD206阳性细胞数量随时间推移不断增加；相同时间点小肠中的TLR2和CD206阳性细胞数目的差异比较：第1天差异无统计学意义(P>0.05),7、14、21天差异均有统计学意义(P<0.05),而停止喂养干酪乳酸菌后小肠中TLR2及CD206阳性细胞仍有增长,且实验组小肠中TLR2及CD206阳性细胞数仍高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。 5.脾脏免疫荧光染色：对荧光染色的脾脏组织进行图形分析,测量平均光密度值发现：同组SD大鼠脾脏中TLR2平均光密度值在不同实验点差异无统计学意义(P>0.05),相同实验点两组比较TLR2光密度值差异亦无统计学意义(P>0.05);同组不同天数CD206脾脏的光密度值第7、14、21天差异有统计学意义(P<0.05),停止喂养干酪乳酸菌后脾脏中CD206免疫荧光光密度值仍有增长。有统计学意义(P<0.05).。 结论： 1.实验剂量和间期的干酪乳酸杆菌对新生SD大鼠是安全的,不会增加新生SD大鼠的死亡率及造成新生SD大鼠的菌血症和败血症。 2.口服干酪乳酸杆菌在实验间期内对新生SD大鼠的体重无明显影响。 3.新生SD大鼠小肠和脾脏中TLR2和CD206水平随年龄增加而增加,且干酪乳酸杆菌能够激活TLR2和CD206,从而激活抗原呈递细胞产生一系列炎症反应,协调先天性和获得性免疫反应.。 4.干酪乳酸杆菌的免疫调节作用具有一定的“后遗效应”。