猪附红细胞体病病理组织学研究及PPA-ELISA诊断方法的建立

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本试验以自然感染猪为实验动物。无菌采集其抗凝血,经扫描电镜观察,发现血浆中有游离附红细胞体,红细胞膜上也不同程度附有附红体,附有附红体的红细胞有变形,呈乳头状突起;采取其内脏器官(心、肝、脾、肺、肾及淋巴结)进行病理组织学研究,显微结果表明,心肌纤维染色不均,肝细胞颗粒变性,脾窦中有纤维素沉积,肺轻度淤血,肾小管上皮细胞有坏死,超微结构显示,心肌线粒体部分空泡化,肌节收缩,脾窦中浆细胞内质网和核蛋白分离,肝脏吞噬细胞活跃,肾小球基底膜不规则增厚,淋巴细胞核固缩,染色质消失,肺泡腔中充有红细胞和溶解的吞噬细胞。从而证实,猪附红细胞体感染对内脏各器官有不同程度的病理损伤。借助酶标SPA进行ELISA诊断方法的建立,经确定体系反应条件为:酶标SPA工作浓度1:40,封闭剂为含明胶0.3%的水溶液,阳性血清工作浓度为1:640,抗原工作浓度为1:80(蛋白含量为0.04mg/mL),除显色时间为15min外,其余反应时间均为37℃,30min。结果显示,用抗原难以有效检测到自然感染猪血清中的特异性抗体,但用阳性血清可有效检测到猪附红细胞体,阳性检出率约100%。经多次试验,该方法应用于猪附红细胞体病实验室诊断或大规模检疫时,准确可靠,有着良好的特异性、敏感性和可重复性。
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