余甘子化学成分及总酚提取工艺研究

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本论文共分为四章。第一章文献综述余甘子为大戟科叶下珠属植物余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥果实。甘、酸、涩、凉,归肺、胃经,清热解毒,利咽生津,润肺化痰。本文共引用文献83篇对余甘子的主要化学成分及药理作用研究进行了综述,目前研究表明,余甘子主要含有酚类、黄酮类成分,具有抗HBV、抗癌、抗病毒、降脂、抗氧化、保肝等多种功效,临床用于治疗乙肝、高血压、肥胖及抗炎,而酚类化合物是其物质基础。第二章余甘子化学成分研究采用多种分离纯化方法,对余甘子60%丙酮提取物中的化学成分进行了研究,共分离得到7个化合物。通过各种理化及波谱技术(如MS、1HNMR、13CNMR等)鉴定化合物,目前鉴定了其中的6个,5个酚类化合物分别是没食子酸(gallicacid)、鞣花酸(ellagic acid)、1-O-G-β-D-glucose、mucic acid 2-O-gallate、诃黎勒酸(chebuligic acid)、1个黄酮苷为槲皮素-3-O-鼠李糖苷(quercetin-3-O-rhamnoside),其余一个化合物结构正在鉴定中。第三章余甘子中总酚提取工艺研究对余甘子中总酚提取工艺进行了研究。采用L9(34)正交试验,以总酚和其中的三个成分诃黎勒酸、没食子酸、mucic acid 2-O-gallate的总酚提取量为考察指标,通过对提取溶剂、提取时间、提取次数、溶剂用量的考察,建立了余甘子总酚的最佳提取工艺,即A2%乙醇提取B3小时,共提取C3次,溶剂用量为D3倍。并对余甘子总酚提取物最佳提取工艺进行了验证,结果表明该提取工艺合理、稳定。第四章余甘子药材和总酚提取物质量控制方法研究建立了三氯化铁-铁氰化钾比色法测定余甘子药材和总酚提取物中总酚含量的方法。采用三氯化铁-铁氰化钾比色法,以没食子酸为对照品对余甘子药材和总酚提取物进行定量分析,没食子酸的线性回归方程为v=0.5338x+0.0047(r=0.9992),表明没食子酸在0.204~2.040μg/ml范围内与吸光度呈良好线性关系。余甘子药材的平均加样回收率为98.50%,RSD=2.88%,提取物的平均加样回收率为101.57%,RSD=2.65%。测得余甘子总酚提取物中总酚的平均含量为35.82%,该方法准确、可靠、稳定性好,可作为余甘子总酚提取物质量控制的有效方法之一。采用单因素分析与正交试验相结合,优选了药材总酚含量测定的样品溶液处理方法,并对余甘子药材总酚进行测定,采用干酪素吸附法处理样品溶液,测定药材中鞣质含量。测得药材中酚类成分含量为17.60%,鞣质含量为7.07%,占酚类成分的40.17%。采用药典法对余甘子中酚类成分及鞣质的含量进行了测定。按照药典规定方法进行测定,没食子酸的回归方程为y=0.0986x+0.0105(r=0.9990),表明没食子酸在1.0072~10.072μg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系。测得药材中酚类成分含量为22.67%,鞣质含量为9.57%,占酚类成分的42.25%。药典法测定时,药材中酚类成分含量、鞣质含量、及鞣质占酚类成分百分比均较三氯化铁-铁氰化钾测定值略高。建立了余甘子总酚提取物中三个主要成分诃黎勒酸、没食子酸、mucic acid2-O-gallate的HPLC定量分析方法,并对余甘子总酚提取物和余甘子药材进行了含量测定。诃黎勒酸、没食子酸、mucic acid 2-O-gallate的回归方程分别为:诃黎勒酸:y=2E+06x-489.43,r=0.9996,没食子酸:y=2E+06x+51.095,r=0.9996,mucic acid 2-O-gallate:y=569045x-88530,r=0.9996。表明诃黎勒酸、没食子酸、mucic acid 2-O-gallate分别在0.0728~0.364μg、0.1804~0.902μg、0.3872~1.1616μg范围内线性关系良好。诃黎勒酸、没食子酸、mucic acid 2-O-gallate回收率分别为99.92%、100.06%、99.85%,RSD分别为2.45%、2.35%、2.21%。对余甘子总酚提取物和余甘子药材中诃黎勒酸、没食子酸、mucic acid 2-O-gallate进行含量测定,结果表明该方法稳定、准确、可靠,可作为余甘子总酚提取物、余甘子药材中没食子酸等三种成分的含量测定方法,为进一步探讨余甘子总酚提取物质量控制方法提供参考。测得尼泊尔产余甘子药材中诃黎勒酸、没食子酸、mucic acid 2-O-gallate含量分别为2.69%、2.87%、7.71%,云南产余甘子药材中诃黎勒酸、没食子酸、mucic acid 2-O-gallate含量分别为1.91%、2.96%、11.99%。对余甘子总酚提取物中诃黎勒酸、没食子酸、mucic acid 2-O-gallate进行含量测定,分别为4.80%、5.77%、11.71%。
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