前言：　　 先天性肾积水(Congenital hydronephrosis)是常见的危害儿童健康的小儿泌尿系先天性畸形，引起该病的原因很多，其中最常见病因为肾盂输尿管连接部梗阻(pelvi-ureteric junction obstruction PUJO)，目前一些实验研究表明Shh信号通路中的一些转录因子如Gli3、Teashirt3的变化和肾积水肾盂输尿管交界处(pelvi-ureteric junction PUJ)狭窄段的病理改变有关，因此，本文运用免疫组织化学方法、Westeen印迹法及Real-time PCR技术检测PUJO所致先天性肾积水患儿PUJ狭窄段中Gli3和Teashirt3的表达情况，旨在探讨Gli3和Teashirt3在先天性肾盂输尿管连接部梗阻发病中的作用机制。　　 实验材料与方法：　　 1、标本来源　　 中国医科大学附属盛京医院2010年10月-2012年12月小儿泌尿外科手术治疗的60例PUJO所致单侧先天性肾积水患者，术前均行静脉肾盂造影(IVP)、ECT及延迟增强三维重建CT检查，并经手术证实为PUJO所致的先天性肾积水。年龄1月-13岁，平均4.09岁，男51例，女9例;左侧49例，右侧11例。SPU分级:Ⅳ级47例，Ⅲ级13例。经伦理委员会的批准，患者家属知情同意，留取PUJ狭窄段，新鲜离体组织30分钟内-80℃冰箱贮存备用。对照组为同期手术治疗的10例肾母细胞瘤患儿的输尿管组织，病理均为Ⅰ期，无转移，患儿术前未接受化疗。标本分组:PUJO组和正常对照组。　　 2、实验方法　　 (1) HE染色制作石蜡切片，脱蜡，苏木素伊红染色，脱水透明，封片，显微镜下观察。　　 (2)免疫组织化学法SP免疫组织化学方法，实验步骤按试剂盒说明书进行。　　 (3) Western blot　　 取组织块提取总蛋白，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，转印后分别用抗Gli3和抗Teashirt3抗体孵育，加入用碱性磷酸酶标记的相应二抗，显色后置于凝胶成像仪成像。　　 (4) Real-time PCR　　 Trizol一步法提取总RNA，逆转录成cDNA后，进行Real-time PCR扩增。　　 (5)统计学分析　　 实验数据结果以均值±标准差（(x)±s）表示，使用SPSS17.0统计软件进行统计学处理，PUJO组与正常对照组间比较采用两样本的t检验，p＜0.05为差异具有显著性意义。　　 结果：　　 1、HE染色结果　　 镜下可见:PUJO组PUJ狭窄段平滑肌肥厚和间质增生，肌纤维排列紊乱。正常对照组未见异常，无肿瘤细胞浸润。　　 2、免疫组织化学染色结果　　 免疫组化结果显示:在正常对照组中，Gli3和Teashirt3呈阳性表达，均表达在输尿管平滑肌细胞胞浆。PUJ组狭窄段中未见Gli3和Teashirt3的表达。　　 3、Western blot检测结果　　 Western blot结果显示:以β-actin的表达量作为内标进行标准化处理得相对表达强度，Gli3在正常对照组为1.3068±0.0289，在PUJO组为0.0243±0.0819;Teashirt3在正常对照组为1.0682±0.0837，在PUJO组为0.0241±0.0719。Gli3和Teashirt3在PUJO组和正常对照组PUJ组织中的表达差异有统计学意义(p＜0.05)。　　 4、Real-time PCR技术检测结果　　 Real-time PCR结果显示:采用相对定量2-ΔΔCt法比较各基因，Gli3mRNA的表达在PUJO组是正常对照组的0.05倍;Teashirt3mRNA的表达在PUJO组是正常对照组的0.03倍。　　 结论：　　 PUJO所致先天性肾积水患儿肾盂输尿管连接部平滑肌纤维排列紊乱，Gli3和Teashirt3蛋白表达位于肾盂输尿管连接部平滑肌细胞胞浆内，并且Gli3和Teashirt3蛋白及mRNA在先天性肾积水患儿肾盂输尿管交界处中表达下调。Gli3和Teashirt3可能在先天性肾盂输尿管连接部梗阻的发生过程中发挥重要作用，是输尿管平滑肌正常发育不可缺少的因素。