论文部分内容阅读
目的研究低氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)对甲状腺乳头状癌和甲状腺未分化癌侵袭转移的影响,并初步探讨HIF-1α及其下游分子蛋白锌指转录因子(Snail)、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、间质细胞波形蛋白(Vimentin)和基质金属蛋白酶2(MMP2)在其中的作用及相关性。方法用5%O2的低氧培养箱培养甲状腺未分化癌FRO细胞不同时间(0h、2h、4h、8h和12h),在倒置显微镜下观察其细胞形态的改变,用Western blotting法检测各组细胞中HIF-1α、Snail、E-cadherin、Vimentin、MMP2的蛋白表达;将FRO细胞分为正常氧组、YC-1+常氧组、低氧组、YC-1+低氧组和常氧+CoCl2组,用Western blotting法检测各组中HIF-1α、Snail、E-cadherin、Vimentin和MMP2蛋白的表达;用Transwell侵袭和迁移实验检测以上5组中细胞侵袭和迁移能力的变化。用免疫组化SP法,检测83例人甲状腺乳头状癌组织中HIF-1α、Snail、E-cadherin和MMP2的表达情况;将甲状腺乳头状癌NPA细胞在5%O2的低氧培养箱中培养12h后,用Western blotting方法检测其HIF-1α、Snail、E-cadherin和MMP2的表达;用Transwell侵袭实验检测低氧处理12h组与常氧组NPA细胞侵袭能力的改变。结果随着低氧处理时间的延长,可观察到FRO细胞逐渐发生间质样细胞的改变; HIF-1α、Snail、Vimentin和MMP2的蛋白表达呈时间依赖性增高,低氧处理12h达到最高,且低氧12h组较0h组显著增多(P<0.01);上皮细胞特征性蛋白E-cadherin的表达量持续减少(P<0.01);低氧组和常氧+CoCl2组中FRO细胞HIF-1α、Snail、Vimentin、MMP2蛋白表达水平较对照组明显增多(P<0.05),E-cadherin表达则明显减少(P<0.05);低氧组和常氧+CoCl2组转移和迁移细胞数较对照组均显著增多(P<0.01)。在83例甲状腺乳头状癌组织中,HIF-1α、Snail、E-cadherin和MMP2的阳性率分别为71.08%(59/83)、66.27%(55/83)、44.58%(37/83)和73.49%(61/83);HIF-1α、Snail、E-cadherin和MMP2的表达与肿瘤直径和年龄无关,与TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05);HIF-1α与Snail呈正相关(r=0.276P<0.05),Snail与E-cadherin呈负相关(r=-0.431P<0.01), HIF-1α和Snail分别与MMP2均呈显著正相关(r=0.368P<0.01;r=0.220P<0.05);NPA细胞经过5%O2的低氧处理12h后,其HIF-1α、Snail和MMP2的表达较常氧组显著增多(P<0.01),E-cadherin表达较常氧组减少(P<0.05);NPA细胞低氧组较常氧组细胞侵袭能力显著增强。结论在5%O2低氧条件下,HIF-1α在甲状腺乳头状癌NPA细胞和甲状腺未分化癌FRO细胞中表达增多,并且促进NPA细胞和FRO细胞侵袭和转移,其分子机制可能是HIF-1α上调Snail、Vimentin和MMP2的表达,下调E-cadherin的表达。甲状腺乳头状癌组织中HIF-1α、Snail、MMP2和E-cadherin的表达与其淋巴结转移密切相关,推测HIF-1α、Snail、E-cadherin和MMP2可作为判定甲状腺癌侵袭转移和预后的分子指标。