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尼帕病毒（Nipah virus,NiV）是一种宿主范围广,致死率高的动物源性病毒[1-4],与亨德拉病毒（Hendra virus,He V）同属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）副黏病毒亚科（Paramyxovirinae）亨尼病毒属（Henipavirus）[5]。1998年末,NiV首次暴发于马来西亚的养猪场中[6]。1999年,265例人感染病例中有105例死亡,死亡率高达40%[7]。因病毒分离于尼帕镇,故被命名为尼帕病毒[8-10]。NiV感染导致尼帕病毒病（Nipah virus disease,NVD）,病情严重者可致死亡[11-13]。2001年孟加拉国发现尼帕疫情,随后几乎每年都有疫情发生[14,15]。此外,在印度、柬埔寨、菲律宾等地也发现该疾病[16]。序列分析表明,尼帕病毒至少分为两个进化支,孟加拉分离支和马来西亚分离支[17]。在马来西亚的疫情中病毒从果蝠传给猪,猪再传给人,在孟加拉国,病毒直接从果蝠传给人类,随后出现人际间传播[18,19]。因目前没有针对此病毒的有效疫苗和药物,2018年NiV被列为优先研究的传染病,迫切需要加速对此病毒的研究[20]。由于NiV的高毒力,高致死率,美国疾病控制与预防中心（Centers for Disease Control and Prevention,CDC）将其归为生物安全4级（BLS-4）病原体[21-27]。因此,有关此病毒的研究对实验条件及实验者有严格的标准。本课题的设计思路是在本科室已构建的高滴度的NiV假病毒的基础上,选择和构建目前为止所有可从National Center for Biotechnology Information（NCBI）网站上下载的尼帕病毒流行株,并对不同分离时间、不同分离地点、不同物种来源的病毒株的融合蛋白（fusion protein,F）即F蛋白、吸附蛋白（attachment protein,G）即G蛋白的氨基酸进行分析。NiV感染细胞需要两种蛋白的参与,即F蛋白和G蛋白。本研究在本科室已构建的NiV参考株即马来西亚株（Genbank:AF212302）假病毒的基础上,经突变或密码子优化后合成了以下尼帕病毒流行株的F蛋白及G蛋白的基因序列,流行株的Genbank号分别为FJ513087.1、JN808864.1、AJ627196.1、AY988601.1、MK801755、FN869553.1、AF376747.1、JN808863.1、MH396625.1。分别构建各流行株的真核表达质粒pc DNA3.1-NiV-F、pc DNA3.1-NiV-G,与HIV骨架质粒共转染HEK293T细胞,包装各流行株NiV假病毒。各流行株假病毒包装时所用的转染试剂、骨架质粒、膜质粒与骨架质粒的质量比例、收毒时间等条件均与已构建的参考株假病毒所用条件一致。最终成功构建5株尼帕流行株的假病毒,即FJ513087.1、JN808864.1、MK801755、JN808863.1、MH396625.1。利用已成功构建的NiV各流行株假病毒评价针对参考株的DNA疫苗和单抗的中和广谱性。结果发现针对参考株设计的DNA疫苗对NiV流行株均具有较好的保护作用,具有中和广谱性。在针对参考株的单抗中,F单抗对所有流行株都有中和活性。针对G蛋白的单抗中,单抗NIG02-1G9对病毒株3;单抗NIG05-4F1对病毒株10;单抗NIG05-3C8对病毒株2、9、10的中和活性与参考株相比下降了4倍以上。对未成功构建的病毒株进行序列分析及突变,探究影响假病毒包装的位点,结果显示影响病毒株FN869553.1的氨基酸位点分别为F蛋白的63和460位;影响病毒株AF376747.1的氨基酸位点为F蛋白的348位;影响病毒株AJ627196.1的氨基酸位点分别为G蛋白的20和272位;影响病毒株AY988601.1的氨基酸位点分别为F蛋白的207和252位。在NiV高滴度假病毒基础上,建立了NiV参考株假病毒可视化金黄地鼠感染模型。通过腹腔注射（IP）感染5～6周龄的金黄地鼠,运用活体成像技术,动态观察假病毒在金黄地鼠体内的分布情况,主要感染脏器为脾、胰、肝、心脏。