目的：流行性感冒（influenza，简称流感）是由流感病毒引起的一种严重威胁人类健康的急性呼吸道传染病，由于流感病毒传播速度快及抗原的易变性，目前尚未能有效控制，流感依然是对人类健康构成威胁的主要呼吸道传染病之一，被我国列为丙类法定传染病。流感病毒分为甲、乙、丙三型，其中甲型流感抗原变异频繁，在上世纪曾经导致三次世界性大流行。　　 目前，国际上预防与治疗流感的主要措施是疫苗接种、药物治疗和预防。由于疫苗的免疫效果受到多方面的影响，其使用有一定局限性，多年的临床实验表明疫苗接种并不能提供满意的保护，有时保护率低于50％。抗病毒药物既能用于预防流感，又能为急症患者提供治疗，在控制流感方面发挥着重要作用。目前抗流感病毒的药物主要包括两大类，一种为M2离子通道阻滞剂，包括金刚烷胺和金刚乙胺，主要用于甲型流感的预防和治疗；另一类为神经氨酸酶抑制剂，包括奥斯它韦和扎那米韦，可用于甲型和乙型流感的预防和治疗。2003年以前，社区分离株研究结果显示，流感病毒对烷胺类药物耐药性产生的机率很小，但2003年以后从使用金刚烷胺的流感病人中分离得到的耐药突变株频率逐渐增高。研究表明，这种突变株可能会经密切接触进行传播，并使得化学药物预防无效。河北省甲型流感病毒对金刚烷胺类药物的耐药情况还不清楚，鉴于对金刚烷胺类药物耐药的分子机制已经比较清楚，主要与M2蛋白跨膜区密切相关，因此，本研究对2003～2008流行期河北省分离的甲型流感病毒M2蛋白基因进行了测序，分析耐药性位点变异情况，掌握对金刚烷胺耐药发生率，为流感临床合理用药和预防提供科学依据。　　 方法：　　 （1）选取河北省2003-2008年流行期河北省疾病预防控制中心全国流感监测网络实验室分离到的全部甲1、甲3亚型流感毒株作为研究对象，所有毒株均经国家流感中心进行复核鉴定。共选取甲型流感病毒305株，其中，甲3亚型229株，甲1亚型76株。　　 （2）提取病毒RNA，用RT-PCR一步法扩增流感病毒M2基因片段，产物测定核酸序列。　　 （3）用生物信息软件与烷胺类药物敏感毒株进行分析比较，以M2蛋白跨膜区26、27、30、31和34位氨基酸中任一位置发生突变为标准判定是否为耐药毒株。　　 结果：　　 （1）2003-2008流行期流感监测网络实验室共分离出流感病毒436株，其中甲型流感病毒305株（H1N1 76株，H3N2229株），占69.95％，乙型流感病毒131株，占30.04％。　　 （2）305份标本用特异引物对M2基因片段进行扩增，2.0％琼脂糖凝胶电泳后，均出现预期大小约152bp的条带扩增片段。　　 （3）河北省305株甲型流感病毒中，有250株为对烷胺类药物耐药毒株，耐药率为81.97％。2003-2008年5个流行期耐药率分别为90.32％（84/93）、78.94％（30/38）、29.62％（16/54）、100％（113/113）和 100％（7/7）。　　 （4）229株H3N2亚型流感病毒中有212株耐药，耐药率为92.57％。76株H1N1亚型流感病毒中有38株耐药，耐药率为50.00％（38/76）。　　 （5）250株对烷胺类药物耐药的甲型流感毒株有6株在M2蛋白跨膜区氨基酸发生了V27A点置换，占2.40％；244株发生了S31N位点置换，占97.60％；26、30和34位氨基酸均未发生改变。　　 （6）212株H3N2亚型流感病毒耐药株中，有5株发生了V27A置换，占2.36％；207株发生了S31N置换，占97.64％，其中5株同时发生了V271和S31N位点置换，占2.36％，3株同时发生了A29T和S31N位点置换，占1.42％。　　 （7）38株H1N1耐药株中，有1株发生了V27A置换，占2.63％，37株发生了S31N置换，占97.37％。　　 （8）212株H3N2亚型流感病毒耐药株中，有3株同时发生了A29T和S31N位点置换，占1.42％，未见相关文献报道。　　 结论：　　 （1）用M2蛋白跨膜区氨基酸变异分析方法显示，2003-2008流行期河北省分离到的305株甲型流感病毒有250株对烷胺类药物耐药，各流行期耐药率分别为90.32％、78.94％、29.62％、100％和 100％，平均耐药率为81.97％。　　 （2）河北省甲型流感病毒M2蛋白跨膜区耐药位点以S31N为主，其次为V27A，26、30和34均未发生改变。　　 （3）发现了H3N2亚型毒株M2蛋白跨膜区A29T和S31N位点同时突变的现象，文献未见报道。　　 （4）在甲型流感病毒金刚烷胺敏感株重新在人群流行之前，不应该使用金刚烷胺类药物预防或治疗流感。　　 （5）应进行联合用抗流感病毒药物，加强新药研发和耐药性监测工作。