铁皮石斛种苗质量标准及种苗繁育技术规程研究蛇足石杉孢子繁殖及内生真菌诱导其基因表达的转录组分析

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ymeng123
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铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)多年生草本植物,被列为濒危植物,是我国名贵中药材品种。本研究针对目前铁皮石斛大规模种植中存在的种苗数量不足、质量良莠不齐、移栽成活率低等问题,建立了铁皮石斛试管种苗的分级标准和种苗繁育技术规程。通过测定不同生长时期铁皮石斛试管苗及移栽苗的生长指标,利用主成分分析确定种苗生长指标主成分,利用聚类分析建立分级标准,并对分级后移栽的试管苗生长情况进行评价。确定以苗高、茎粗、叶数、叶宽和根长作为分级指标,可将铁皮石斛试管种苗分为3个等级。利用该分级标准开展的分级移栽实验表明,分级移栽的试管苗较混合移栽在成活率、苗高、茎粗、叶数、鲜重等方面都能得到显著增高(P<0.05),说明该分级标准可以在生产中加以参考应用,为铁皮石斛种苗的流通和铁皮石斛的规范化种植提供依据。  蛇足石杉(Huperzia serrata(Thunb ex Murray)Trev.)为多年生蕨类植物,是新一代乙酰胆碱酯酶抑制剂石杉碱甲的药源植物。蛇足石杉在自然条件下的繁殖力非常低,加上过度采挖,野生资源日渐贫乏,资源的可持续利用已成为目前亟待解决的问题。虽有文献报道蛇足石杉可通过外植体进行组织培养,但由于蛇足石杉在自然条件下与内生菌共存,使得外植体的灭菌很困难,蛇足石杉的快繁体系一直未能建立。本实验通过蛇足石杉的孢子繁殖展开初步研究,针对孢子破壁十分困难这一瓶颈问题,通过多种方法对孢子进行破壁处理,结果冻融法破壁处理的孢子接入1/2MS培养基中,经过2.5个月,观察到有孢子萌发,虽然萌发率比较低,但是重复性良好。通过对原叶体rbcL基因的扩增和聚类分析,表明己通过孢子萌发诱导出蛇足石杉原叶体,同时,还有其它蕨类植物的孢子也被诱导萌发。目前,蛇足石杉孢子体的诱导还在进行中,可为蛇足石杉种质资源的保护和可持续利用提供新的技术途径。  为了解内生真菌对蛇足石杉基因表达的影响,利用前期从蛇足石杉分离纯化出的一株具有石杉碱甲生成能力的内生真菌2F09P03B,在转录组水平比较内生真菌侵染前后蛇足石杉基因的表达情况。结果表明,内生真菌2F09P03B侵染蛇足石杉前后,有5615个基因呈差异表达。结合KEGG对部分差异表达基因的研究表明,内生真菌2F09P03B能够通过增强天冬氨酸氨基转移酶、酪氨酸氨基转移酶、组氨酸氨基转移酶、伯胺氧化酶等基因的表达,促进蛇足石杉体内生物碱的合成;能够通过促进SOD编码基因的表达增强抗逆性;能够通过促进生长素受体蛋白TIR1编码基因的表达,促进植物的生长,为利用生物芯片开展内生真菌与宿主植物关系的研究打下了基础。
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