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本研究对8个血管性血友病家系、6个血小板无力症家系和1个血友病A家系分别进行了临床诊断、家系调查、表型检测和基因分析，并对新发现的5个VWF基因突变、3个αⅡb基因突变及1个CRM+F8基因突变构建表达质粒进行体外表达研究，以探讨其分子发病机制。血管性血友病因子(von Willebrand Factor，VWF)是血管内皮细胞和巨核细胞合成的一种糖蛋白。其质的缺陷和量的缺乏会导致血管性血友病(von Willebrand disease，VWD)。遗传性VWD分为三种类型：1型(VWF量的部分缺乏)、2型(VWF质的缺陷，又分为2A、2B、2M和2N四个亚型)和3型(VWF量的完全缺乏)，这3种类型和2型各亚型间具有不同的生理发生机制。本研究采用VWD国际化诊断及分型方法，对8个遗传性VWD家系及其家系成员进行诊断及分型，共诊断1型2例、2A型1例、2B型1例、2M型1例、2N型1例、3型2例计8例患者。VWF基因分析共发现8个新突变分别包括6个点突变（E216K、C237W、R816W、L1307R、R2287Q和Q2657X）和2个插入/缺失突变（1282ins8和2161delC）。除R816W突变为国内首次报道外，其余7个突变均为国际首次报道。针对发现的5个新突变（C237W、R816W、2161delC、L1307R、1282ins8）通过构建突变型表达质粒，瞬时转染COS7细胞，收集细胞表达上清及细胞裂解液，分别测定上清液及细胞裂解液的VWF:Ag及上清液的WF:CB。体外表达研究发现R816W突变蛋白合成及分泌正常，但突变蛋白功能（胶原结合活性降低）减低，其余4种突变均存在蛋白分泌障碍或者降解加速。遗传性血小板无力症(Glanzmann thrombasthenia, GT）是一种少见的呈常染色体隐性遗传的血小板功能缺陷性疾病。GT可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三型。Ⅰ型和Ⅱ型血小板无力症是由血小板表面αⅡbβ3数量的减少所致，而变异型血小板无力症是由血小板表面αⅡbβ3质的异常所致。本研究中的6个血小板无力症(GT)家系，流式细胞术检测血小板膜αⅡbβ3，家系1，3，4，5 中的先证者血小板表面 GPⅡb 和 GPⅢa 阳性血小板都极度降低（<5％），表型诊断为GTⅠ型；家系2的先证者血小板表面GPⅡb和GPⅢa阳性血小板百分率分别为9.7％和26.8％，表型诊断为GTⅡ型。而家系6的先证者血小板表面GPⅡb和GPⅢa阳性血小板百分率分别为87.5％和96.5％，表型诊断为GT Ⅲ型。6个先证者αⅡb和β3基因分析共发现7种位于αⅡb基因上的突变，包括4个点突变（R553X、Q860X、F331L、D560A）、1个剪切位点突变IVS20-1G>A)、1个缺失突变(1631-1732del)及1种纯合性插入突变SY3（1529_1530insT, 1531A>C, 1532G>C and1533A>T）。同时发现2种位于β3基因上的突变分别是Q272X和1748delC。其中IVS20-1G>A 、1631-1732del 、SY3 （ 1529_1530insT, 1531A>C,1532G>C and 1533A>T）、Q272X、1748delC为国际首次报道的新突变。我们将其中的3个αⅡb突变（F331L、D560A、SY3）构建αⅡb突变质粒与野生型β3质粒瞬时共转染CHO细胞，进行体外表达实验。研究发现F331L、D560A突变在细胞内正常合成不影响αⅡb与β3复合物形成，但削弱血小板的激活及纤维蛋白原的结合作用。而SY3（1529_1530insT,1531A>C, 1532G>C and 1533A>T）插入突变产生正常分子量大小蛋白而非截断蛋白，但导致细胞中GPⅡb蛋白合成减少及αⅡb与β3复合物形成障碍。血友病A为最常见的遗传性出血病，是由于凝血因子Ⅷ (FⅧ) 生成或功能异常所致的遗传性出血病，在男性的发病率为1/5000。其发病原因是由于凝血因子Ⅷ（FⅧ)基因突变导致凝血因子Ⅷ功能缺陷或含量不足。实验室凝血功能检查FⅧ凝血活性（FⅧ:C）是诊断血友病A的主要依据。FⅧ:C<1％为重型，1％～5％为中型，5％～25％为轻型。本组在对近百例血友病A的基因诊断中，发现了1 种CRM+ 的F8基因突变－His99Arg(H99R)。该患者无自发性关节、肌肉及粘膜组织出血，只在手术时表现为出血过多。实验室表型诊断发现FⅧ:C<1％， FⅧ:Ag为120％，属于重型血友病A。F8基因分析显示在F8基因存在His99Arg(H99R)错义突变。我们构建突变型H99R表达质粒，瞬转293T细胞进行体外表达的研究。研究发现His99Arg突变蛋白表达量与野生型相比明显增高，但FⅧ蛋白活性显著降低，可见H99R突变质粒表达无功能的FⅧ蛋白。