葡萄白腐病菌拮抗菌的筛选及其抗菌物质研究

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化学农药是目前真菌防治的主要方法,但由它引起环境的污染对人类健康已经造成很大的潜在威胁。从土壤含有的大量有益微生物中可以寻找可用作生物肥料或生物农药的菌种。本试验的主要目的是把具有良好拮抗效果的拮抗菌从土壤中分离并筛选出来。以牛肉膏蛋白胨培养基为分离用培养基,从所采集的土样中分离筛选出59株对葡萄白腐病菌有抑制作用的拮抗菌。经过多次筛选最终筛选出1株对多种植物病原菌有抑制作用的拮抗菌L26,革兰氏染色为阳性。L26菌株的发酵液抗菌谱较广,几乎能够抑制所有的被测试的真菌,对葡萄白腐病菌、尖孢镰刀菌,玉米小斑病菌等也有强烈的抑制作用,此外还能够抑制黄曲霉、毛霉、黑曲霉等很多能使食品腐败的细菌。将枯草芽孢杆菌L26发酵溶液经过饱和度80%的硫酸铵沉淀初步纯化后,用Hiload sepharose Q阴离子交换层析经阶梯状梯度洗脱得到了一个有抑菌活性组分。抗菌谱检测显示,该活性组分对多种植物病原菌都有很有的抑菌活性。然后用Hitrap desaulting凝胶过滤层析对样品脱盐,去除离子等小分子杂质,再利用HiPrep Superdex75HR柱子对活性组分进行纯化,然后把活性组分收集,用高效液相对收集的组分进行分析结果为单一峰,说明纯度较高。抗菌活性物质LA具有很好的热和pH值稳定性,木瓜蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶对其活性几乎没有影响。且对多种植物致病菌具有很好的拮抗性,具有广谱抗菌谱,但不具有几丁质酶、淀粉酶、葡萄糖苷酶活性。枯草芽胞杆菌L26是一种无毒、安全、无致病性的菌种,从其发酵液中分离得到的物质稳定性好,易于保存,可用于生物抗菌,作为生物农药的原始出发物。
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