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本文以水稻纹枯病菌为研究对象,期望从土壤中分离筛选得到对水稻纹枯病菌具有抑制作用的生防菌株。生防菌株的分离筛选仅是微生物农药研发的开始,在此基础上通过形态学、生理生化特性及分子生物学对生防菌株进行鉴定,确定其分类地位,能够为其的进一步开发利用提供基础。通过对其发酵条件方面进行研究,提高生防菌株的抗菌物质产量。掌握抗菌物质的理化性质,为进一步分离纯化提供依据。了解生防菌株的抗菌机制,可以为将来的生物农药的开发提供理论支持,最终达到高效、安全地防治水稻纹枯病害。1.水稻纹枯病生防菌的筛选与鉴定从辽宁省、吉林省和黑龙江省多个地区采集水稻田土样。采用3点对峙培养法、菌丝生长速率法、菌核萌发抑制法、离体防效试验和室内盆栽防效试验的方法综合筛选对水稻纹枯病菌有生防作用的生防菌。结果表明:从土壤中分离获得的211株生防菌中筛选出抑菌活性较高的1株真菌JLF6-2和3株细菌为JLN3-2、SYN6-3和JLN3-8。4株生防菌株抑菌圈分别为38.30 mm、18.30 mm、33.30 mm和22.50 mm;菌丝生长抑制率分别为77.30%、63.29%、80.35%和100%;菌核萌发抑制率分别为86.67%、83.33%、80.00%和61.35%;离体试验结果表明:保护处理中JLN3-2在24h的防效为94.92%,治疗处理中JLN3-2在8h的防效为74.58%;室内盆栽防效试验结果表明:JLN3-8的防效最高为86.42%。经形态特征、生理生化特性和分子生物学鉴定结果表明:菌株JLF6-2为比莱青霉（Penicillium bilaiae）;JLN3-2为纺锤形赖氨酸芽孢杆菌（Lysinibacillus fusiformis）;SYN6-3为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）;JLN3-8为侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）。2.生防细菌发酵条件的研究采用单因素试验和正交试验的方法对3株生防细菌的发酵条件进行系统研究,结果显示:3株生防细菌的最适发酵培养基配方为:酵母浸膏5g、蔗糖20g、蛋白胨10g、氯化钠5g、蒸馏水1000m L。菌株JLN3-2的最佳发酵条件:发酵时间48h、温度28℃、初始pH为7、起始接菌量5%、接种菌龄20h、装液量80mL/250mL和摇床转速150r.min-1;菌株SYN6-3的最佳发酵条件:发酵时间48h、温度28℃、初始pH为7、起始接菌量5%、接种菌龄20h、装液量120mL/250mL和摇床转速150r.min-1;菌株JLN3-8的最佳发酵条件:发酵时间48h、温度28℃、初始pH为8、起始接菌量5%、接种菌龄20h、装液量120mL/250mL和摇床转速150r.min-1。3.生防细菌发酵产物理化性质研究及对作物安全性评价理化性质测定结果表明:3株细菌的无菌滤液具有良好的热稳定性,在80℃以下处理10120min后均有良好的抑菌活性,但对其进行120℃高温处理时易引起失活;在中性及弱碱环境中3株细菌菌株无菌滤液抗菌活性较高,具有良好的稳定性;光照稳定性和耐储稳定性试验测定结果显示,3株细菌无菌滤液具有较高的光照稳定性,并且在低温条件下保存稳定性较好,可以长期保存。安全性测定结果表明:3株细菌的无菌发酵滤液对发芽率有一定的影响,对胚根和芽的生长有一定的促生作用;发酵滤液对作物植株安全性的结果显示3株细菌发酵液对8种供试作物叶片均未产生病斑,供试作物的叶片色泽与对照组相比无明显差异,说明这3株生防菌发酵液对供试作物相对安全。抑菌谱试验显示3株细菌菌株具有较广的抑菌谱。4.生防细菌作用机制的初步研究生防菌抗菌物质对水稻纹枯病菌丝和菌核生长有较强的抑制作用,使菌丝体膨大畸形,原生质体凝结或溶解;而抗菌物质能显著抑制水稻纹枯病菌核的萌发。菌株发酵液对水稻防御酶活性和活性氧含量具有明显的提高,其中JLN3-2、SYN6-3和JLN3-8菌株能有效诱导水稻叶片中PAL、POD和PPO酶活性的增强,具有较长的持效性;而T-SOD和CAT酶活性亦有一定的提高,但持效期较短;生防细菌亦诱导水稻叶片中O2-和H2O2含量增加,从而提高其抗病性。