线粒体是细胞合成ATP和氧化磷酸化的主要场所,为细胞的机体活动提供能量。此外,线粒体还参与细胞凋亡和细胞信息传递等过程。线粒体具有双层膜结构,正常的线粒体跨膜电位是线粒体行使生理功能的先决条件,是保持机体生理所必需的。ATP合酶这一供能机制发生障碍必将导致细胞细胞的线粒体跨膜电位降低,从而引起细胞一系列变化。线粒体通透性转换孔是线粒体上的一个特殊孔道,被认为是导致细胞凋亡的关键因素之一。亲环蛋白D(CyPD)被认为是该孔道组成成分之一,参与由线粒体通透性性转换孔(MPTP)开放引起的细胞凋亡。MPTP确切的分子结构尚不明确,在维持线粒体和细胞稳定中是否发挥正常的生理作用,是否仅在病理情况下出现,仍存在一定程度的争议。NO作为一种生物活性物质,可以在线粒体中产生,低浓度NO具有抗氧化作用,能够调控线粒体中氧的消耗和活性氧的生成。NO处理可以延长果实贮藏时间、保持果实品质。探究NO处理果蔬线粒体通透性相关的指标变化和NO对CyPD调控鲜有报道。本实验通过PCR技术、RACE技术和蛋白表达技术体系对肥城桃果实CyPD蛋白进行基因克隆及原核表达,并对CyPD蛋白和ANT蛋白进行酵母双杂检验。以不同处理(5、15和30μmol L-1 NO、5μmol L-1 c-PTIO、去离子水)肥城桃为材料,检测其线粒体膜通透性相关指标。实验结果显示肥城桃CyPD基因全长663 bp,编码氨基酸部分为615 bp,CyPD蛋白由204个氨基酸组成。桃果实CyPD蛋白与苹果该蛋白在进化关系上较为亲密。CyPD蛋白可以进行硝基化和谷胱甘肽化反应。CyPD蛋白和ANT蛋白酵母双杂互检实验表明这两种蛋白膜外部分并未发生相互作用。NO处理对CyPD基因拷贝数的下降有促进作用,表明NO可能通过影响CyPD基因拷贝数而间接参与MPTP的调控。与对照(Control)相比,NO处理肥城桃果实减少了线粒体细胞色素C含量,清除NO则增加了细胞色素C的含量。NO处理能够提高桃果实贮藏期线粒体ATP合酶活性,其中15μmol L-1 NO处理效果最好。随着桃果实贮藏时间的延长,不同处理桃果实线粒体膜通透性均出现不同程度的增加,NO处理与Control相比能够显著提高线粒体膜抗性,其中5μmol L-1 NO处理桃果实线粒体在整个贮藏时期内均维持在较低水平。NO处理能够增强桃果实线粒体膜对胁迫或应激信号的抵抗能力,而清除NO会起到相反作用。加入钌红后,不同处理桃果实线粒体荧光强度均出现下降,其中15μmol L-1 NO处理下降值最大,该实验结果表明,NO处理桃果实线粒体会对钙离子调控蛋白产生影响。