肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)流行性广、病程短、病死率高,2010年统计数据显示在我国每年有约34.4万人死于肝细胞癌,占全球肝癌死亡人数55％。肝癌浸润和转移特性是影响肿瘤患者生存和预后的关键因素。因此,深入研究肝癌转移机制并发展新的治疗策略是关系人类健康的重大科学问题。　　HPPCn(Hepatopoietin Cn, HPPCn)是本实验室发现的一种新型肝细胞刺激因子,能够促进肝脏实质细胞的DNA合成和细胞分裂,并能够促进70%肝切除小鼠的肝脏再生。除此以外,研究证实HPPCn的表达和活性与肝癌的发生及发展密切相关。HPPCn能够促进肝癌细胞的增殖及克隆形成,并能通过激活MAPK,SPK,Stat3等信号通路,上调Mcl-1的表达,进而促进肝癌细胞凋亡。干涉肝癌细胞中的HPPCn能够抑制肝癌细胞增殖,促进TSA,阿霉素,Sorafinib等化疗药物诱导的肝癌细胞凋亡。利用肝脏特异转基因小鼠的肝癌诱发模型评价了HPPCn在肝脏中高表达对肿瘤发生及转移的影响,发现HPPCn在肝脏中特异高表达对DEN诱导肝癌的发生率、肿瘤大小、数量及肿瘤标志物的表达无显著影响,但在诱导早期能增加原癌基因c-myc的表达,并明显增加肝癌细胞的肺转移率。肝癌浸润和转移特性是影响肿瘤患者生存和预后的关键因素,因此进一步探讨HPPCn在肝癌转移过程中的作用和机制,对于深入揭示肝癌转移的分子机制,发掘新的肝癌治疗靶标具有重要意义。　　在本研究中,首先检测不同转移能力肝癌细胞中HPPCn及 EMT标志物的表达情况。结果显示HPPCn的含量与肝癌细胞的迁移有关。重组人HPPCn蛋白(rhHPPCn)可以促进肝癌细胞迁移并促进发生不同程度的EMT转化。之后构建了携带HPPCn干涉序列载体,以人肝癌细胞系HepG2为研究对象筛选出稳定干涉HPPCn的肝癌细胞株(si-HPPCn)及阴性对照株(nc-HPPCn)。发现干涉HPPCn后能明显抑制肝癌细胞的EMT转化并使HepG2细胞形态发生改变。采用信号通路阻断剂、细胞免疫组化、WB及分离核蛋白的方法初步探讨了HPPCn促进肝癌细胞EMT的分子机制。前期的临床标本研究显示,HPPCn与肝癌患者的血管浸润有关。所以以人脐静脉内皮细胞系HUVEC为研究对象,考察rhHPPCn对其血管形成的影响。发现rhHPPCn可明显促进HUVEC迁移及血管形成。最后,用Ad-SPK腺病毒感染肝癌细胞LM-3使其SPK过表达,WB检测SPK表达及激活情况;Transwell、划痕实验检测肝癌细胞迁移情况。建立SPK过表达裸鼠模型及HPPCn过表达裸鼠模型,结果显示Ad-SPK及rhHPPCn均促进肿瘤生长和转移,鞘氨醇激酶通过调控血管发生促进肝癌转移。　　肿瘤的转移是一个复杂而连续的过程,包括肿瘤细胞在原发部位的生长、侵及周围正常组织、穿透基底膜、侵及脉管进入循环系统并存活下来到达远隔部位,侵出脉管并在新的部位形成转移灶。肝癌浸润和转移特性是影响肿瘤患者生存和预后的关键因素,因此进一步探索并揭示肝癌转移的分子机制,寻找新的有效的治疗靶点。