【摘 要】
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目的:建立测定资木瓜多糖(CSPS)含量的方法,研究纤维素酶法提取CSPS的最佳工艺。建立佐剂性关节炎(AA)小鼠模型,研究CSPS对AA小鼠的作用,初步探讨其作用机制。 方法:苯酚-
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目的:建立测定资木瓜多糖(CSPS)含量的方法,研究纤维素酶法提取CSPS的最佳工艺。建立佐剂性关节炎(AA)小鼠模型,研究CSPS对AA小鼠的作用,初步探讨其作用机制。 方法:苯酚-硫酸法检测 CSPS含量,考察该方法检测的精密度、稳定性、重现性和回收率;以 CSPS含量为指标,利用单因素实验和正交实验,对影响多糖提取的四个因素(加酶量、pH值、酶解时间、酶解温度)进行优化研究。小鼠足跖部注射弗氏完全佐剂(FCA)诱导建立 AA动物模型,分组给药处理后,足趾容积测量仪检测小鼠足爪肿胀度,电子天平称重计算脾脏、胸腺的指数,流式细胞计数法检测外周血 T淋巴细胞亚群 CD4+、CD8+的表达水平,MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测脾细胞培养液上清中TNF-α、IL-1β、IL-4的水平,HE染色观察关节组织病理形态学改变,免疫组化法测定关节组织 NF-κB/p65表达水平。 结果:(1)苯酚-硫酸法检测CSPS含量的精密度、稳定性、重现性的RSD分别为1.48%、0.558%、0.78%,回收率为97.04%,RSD为3.52%。纤维素酶法提取 CSPS的最佳工艺条件为:加酶量为1.50%,提取温度为55℃,提取时间为2.0h,pH为4.0。最优条件下 CSPS产率为9.24%。(2)CSPS能有效减轻 AA小鼠的原发性和继发性足肿胀,降低免疫脏器指数,降低 CD4+、提高 CD8+T淋巴细胞水平,抑制AA小鼠的脾淋巴细胞增殖反应,降低 AA小鼠脾细胞 TNF-α、IL-1β的产生,提高 IL-4含量;CSPS抑制AA小鼠关节滑膜细胞增生,减轻炎性细胞浸润,关节组织 NF-κB/p65表达下降。(3)与单独使用醋酸泼尼松(PAT)相比,CSPS联合使用PAT,能够减轻PAT的毒副作用,显著降低 TNF-α水平。 结论:(1)苯酚-硫酸法可以用于 CSPS含量测定,纤维素酶能够有效提高 CSPS的得率。(2)CSPS具有防治类风湿性关节炎(RA)作用,机制可能与调节 T淋巴细胞免疫功能,下调 NF-κB/p65的表达,降低致炎因子表达,提高抗炎因子表达有关。(3)CSPS联合使用PAT,对 PAT治疗 RA具有减毒增效作用。
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