Ran在对虾血细胞吞噬中的调节作用及酚氧化酶调控相关miRNA的筛选

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吞噬作用在无脊椎动物的先天性免疫过程中起着非常重要的作用,RanGTPase可以通过与myosin轻链蛋白的相互作用调控对虾血细胞对WSSV病毒的吞噬过程,并防御WSSV的感染,但是关于Ran基因的表达调节还未被报道过。本论文克隆包含TATA盒的Ran GTPase的启动子,利用生物素-链霉亲和素试验发现Ran启动子可与Ran蛋白相互结合,在Drosophila S2细胞中,利用萤光素酶报告基因分析发现Ran GTPase与Ran启动子结合后,萤光素酶活性降低,表明启动子的转录活性降低,导致Ran基因转录水平下调。本研究揭示Ran蛋白可结合自身启动子调节自身的基因转录,这种反馈调节机制是一种新的Ran基因转录调节机制。   由于Ran蛋白在对虾免疫吞噬中的重要作用,因此本研究以Ran蛋白为靶蛋白,筛选免疫增强剂。采用体外测定Ran GTP酶活的方法,筛选获得2个能有效增强Ran酶活的分子,分别为白介素4和溶血卵磷脂;将白介素4和溶血卵磷脂注射对虾后测定吞噬活性,结果表明这2种分子均可显著提高对虾血细胞吞噬活性;血细胞吞噬活性提高使得WSSV拷贝数显著降低,进而显著降低对虾因感染病毒导致的死亡率。本研究为对虾病害的防治提供新的免疫增强剂,也为对虾病害的防治提供新的技术手段。   miRNA是一类长度约为20-25nt的非编码单链小分子RNA,能够对基因进行转录后表达调控,进而参与生长发育、细胞分化、凋亡和增殖等多种生理过程。为获得与酚氧化酶原系统(ProPO)相关的miRNA,本研究分别采用酚氧化酶(PO)激活剂TPCK和抑制剂allythourea处理对虾,再进行miRNA测序。测序结果及差异序列比较发现,19条miRNA在激活剂或抑制剂处理后,表现为上调或下调表达;采用Northern blot验证了试验结果。因此,19条差异miRNA对PO的表达可能具有调控作用,参与ProPO免疫途径。
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