本试验以延边地区野生牧草为原料,进行缩合单宁的分离,并进行分子量和分子结构的测定,探讨其对蛋白质的作用效果,并添加到饲料底物中,进行体外发酵试验,研究不同来源、不同分子量的缩合单宁对体外发酵参数的影响,从单宁分子的角度阐释其对瘤胃发酵过程的影响,为缩合单宁在保护过瘤胃蛋白的进一步应用上提供科学依据。实验一：牧草中缩合单宁的提取、纯化、分离及分析本试验测定了延边地区四种天然含单宁植物中缩合单宁(CT)、水溶性单宁(SCT)、蛋白结合单宁(PCT)以及纤维结合单宁(FCT)的含量。然后以其中的山野豌豆叶片和细叶胡枝子叶片为原材料,研究其缩合单宁的提取工艺条件,并对缩合单宁进行纯化,再用凝胶色谱手段对缩合单宁按照分子量进行分离,最后采用质谱方法估测牧草中缩合单宁的聚合度、分子结构及平均分子量,分析延边地区不同野生植物中缩合单宁的分子质量及其结构特点。另外,还测定了不一样的分子量缩合单宁的结合蛋白质的能力大小。结果表明：不同植物之间缩合单宁含量的差异巨大,平均含量从3.4g/kg至88.6g/kg不等。提取山野豌豆叶片中缩合单宁的料液比为1：40,萃取液用量为2：2；细叶胡枝子的料液比为1：30,萃取液用量为2：3,冷浸提时间均为4小时。测得的山野豌豆的最高聚合度为七聚体,最高分子量为1952Da；细叶胡枝子为十聚体,最高分子量为2850Da。从推断结构上看,这两种植物叶片中的缩合单宁都不是由单一的聚合单元聚合而成的,两种牧草中均含有原翠雀定、原花青定和原天竺葵定三种基本单元,而且都包含取代基棓酰基。山野豌豆叶片中缩合单宁分离得到三部分的平均分子量从大到小依次为915.60Da、783.94Da、456.37Da;细叶胡枝子叶片中缩合单宁分离得到三部分的平均分子量从大到小依次为1368.57Da、886.32Da、607.14Da。缩合单宁与牛血清白蛋白作用的结果显示,相同植物来源的缩合单宁,分子量越大,与蛋白质结合的能力越强。实验二：体外研究不同分子量的缩合单宁对瘤胃发酵参数的影响在体外发酵底物中添加3%上述六种不同分子量的缩合单宁,分别标记为V1组(915.60Da)、V2组(783.94Da)、V3组(456.37Da)、L1组(1368.57Da)、L2组(886.32Da)、L3组(607.14Da)。体外培养24h后测定各处理组的pH值、体外消化率、产气效果、氨态氮(NH3-N)、微生物蛋白(MCP)和挥发性脂肪酸(VFA)。培养过程中,添加缩合单宁各组的pH值高于对照组,但培养至24h时,差异并不显著。而气体产量在整个培养过程中差异显著,所有添加缩合单宁的处理组的总产气量均显著低于对照组,甲烷产量除3h外的其他发酵阶段同样均显著低于对照组。氨态氮与细菌蛋白在培养过程中含量均低于对照组,并且随着培养时间的延长,差异逐渐减小,而且缩合单宁分子量最小的V3组在培养时间达到9h后,与对照组差异不再显著。总挥发性脂肪酸和乙酸产量最低的组为单宁分子量最大的L1组,其次为V1组和L2组,在整个培养过程中均显著低于对照组。丙酸产量也是L1组最高,显著高于对照组以及单宁分子量小的V3组。结果表明,添加的缩合单宁分子量越大,对瘤胃参数的影响越显著。随着分子量的增加,培养过程中pH值下降地越慢,产气量和甲烷产量越低,同样氨态氮、细菌蛋白、总挥发性脂肪酸和乙酸含量均呈降低趋势,只有丙酸产量随着分子量测增加而增加。