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较低。利用Scanprosite在线软件对其进行分析发现,这两条朱砂叶螨酯酶基因都具有B型羧酸酯酶的F-[GR]-G-x(4)-[LIVM]-x-[LIV]-x-G-x-S-[STAG]-G(S是活性部位氨基酸残基)特征结构,TCE1和TCE2基因所对应的B型羧酸酯酶保守结构序列分别为FGGnpdqVtIfGeSAG和FGGdpnrVtLfGqSAG。从GenBank数据库中收到部分代表性的昆虫及蜱螨等酯酶系列的氨基酸序列进行分子进化分析,结果表明,用于分析的所有酯酶大致可以分成几个类群:昆虫ACHE1类群、昆虫ACHE2类群、线虫AChE类群、蜱螨酯酶群、昆虫羧酸酯酶和酯酶群。朱砂叶螨酯酶基因与蜱螨目的微小牛蜱酯酶基因同源性最高且属于比较原始的一个类群。表明克隆获得的两条朱砂叶螨基因应属于酯酶基因。三、朱砂叶螨酯酶基因的mRNA表达量的测定利用反转录多聚酶链式反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法对朱砂叶螨β-actin基因cDNA片段进行了克隆,获得了包含822个碱基对(bp),编码273个氨基酸的β-actin基因片段。并根据此β-actin基因片段序列设计引物,建立了基于SYBR GreenⅠ染料技术的real-time FQ-PCR方法,为以β-actin基因作为内参基因,采用实时荧光定量PCR方法对朱砂叶螨不同功能基因mRNA表达进行定量研究提供了有用的参考依据。在上述研究的基础上,以朱砂叶螨β-actin基因为内参基因,用基于SYBR GreenⅠ染料技术的real-time FQ-PCR方法对朱砂叶螨敏感品系的卵、幼螨、若螨、成螨四个螨态的TCE1和TCE2基因mRNA的相对表达量测定。结果表明,朱砂叶螨TCE1基因在四个螨态中的表达量分别为β-actin基因的0.02334、0.02163、0.02057和0.05130倍;TCE2基因在四个螨态中的表达量分别为β-actin基因的0.0422、0.00636、0.03757和0.23351倍,成螨体内的TCE基因的mRNA表达量显著高于其它各螨态的mRNA表达量,且TCE2基因在成螨体内的mRNA的表达量最高。对朱砂叶螨抗阿维菌素、抗甲氰菊酯和抗氧化乐果三个抗性品系和敏感品系的TCE1和TCE2基因进行了mRNA的相对表达量测定。结果表明,朱砂叶螨三个抗性品系的TCE1基因的表达量分别为敏感品系的0.725倍、1.810倍和2.087倍;TCE2基因的表达量分别为敏感品系的0.882倍、1.490倍和1.703倍。朱砂叶螨抗甲氰菊酯、抗氧化乐果品系的TCE1和TCE2的mRNA表达量都显著高于抗阿维菌素品系和敏感品系;而朱砂叶螨抗阿维菌素品系中两酯酶基因的表达量与敏感品系之间无显著性差异,但均表现有降低的趋势;其中TCE1在朱砂叶螨抗甲氰菊酯、抗氧化乐果两个品系中增加的幅度都高于TCE2基因,但在朱砂叶螨抗阿维菌素品系中其降低的幅度却高于TCE2基因。经过阿维菌素药剂处理后,朱砂叶螨敏感品系体内的TCE1和TCE2基因mRNA的相对表达量分别为处理前的0.32倍和0.84倍,其中TCE1基因的表达在药剂处理前后差异显著。