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第一部分LPS诱导牙髓炎症过程中P2X受体在三叉神经节中的表达和作用研究目的：离子通道型嘌呤受体家族(P2X)可以参与调节初级感觉神经元中的疼痛感觉。本实验目的在于研究在牙髓炎症引起三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)中神经元活化以及P2X受体的表达模式,并采用P2X受体抑制剂观察抑制P2X受体后对痛觉传导相关因子表达的改变的影响。研究方法：本实验将脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)置于大鼠左侧的上颌第一磨牙髓腔,以诱导牙髓炎症。观察了急性牙髓炎症期TG中活化神经元标志c-fos的分布,P2X受体与谷氨酸能神经元和GABA能神经元的关系,并采用免疫组化和蛋白印迹技术观察了TG的V1-V2支中的P2X受体的表达模式。进一步在髓腔中置入P2X受体抑制剂TNP-ATP并同时于大鼠左侧须垫注射TNP-ATP,观察了抑制P2X受体对急性牙髓炎症期TG中c-fos,谷氨酸能神经元标志VGluT1和GABA能神经元标志GAD67表达,以及p38和ERK1/2磷酸化的影响。研究结果：FG逆行性标记显示同侧TG的V1-V2支支配左上颌第一磨牙,牙髓炎症可导致V1-V2支中神经元活化的标志c-fos表达增加；P2X2, P2X3和P2X5受体在TG的神经元胞浆中表达,在牙髓炎症进展的第1天表达增加,至第三天持续增加；P2X2, P2X3和P2X5受体在V1-V2支中的表达增高主要发生在与痛觉传导相关的小直径神经元中。荧光双标记法显示P2X2,P2X3和P2X5受体在V1-V2支中分别与VGluT1和GAD67共表达在小直径的TG神经元的胞浆中；LPS刺激牙髓诱导炎症能导致c-fos, VGluT1和GAD67表达增高,并导致p-p38和p-ERK1/2表达增加；抑制P2X受体会导致c-fos, VGluT1和GAD67的表达增高受到抑制,并降低p-p38和p-ERK1/2表达。研究结论：LPS诱导的急性牙髓炎症可诱导P2X2, P2X3和P2X5受体在活化的TGV1-V2支中的表达增高,提示P2X受体可能参与了牙髓炎症诱导的神经敏感性增高。抑制P2X受体会使牙髓炎症引起的TG中c-fos,VGluT1和GAD67的表达增高受到抑制,并降低p38和ERK1/2的磷酸化。第二部分牙髓炎症对大鼠中枢神经系统中P2X表达的影响研究目的：本实验拟采用大鼠开髓模型诱导大鼠牙髓炎症,目的在于研究不同牙髓炎症进展阶段对脑干的三叉神经脊束核尾端亚核(Vc)和丘脑的腹后中核(VPM)中的影响。研究方法：本实验在大鼠左上颌第一磨牙颌面开髓,并暴露与口腔菌群环境,诱导牙髓炎症。取牙髓炎症第1天,第3天,第7天和第28天时,大鼠双侧脑干的三叉神经脊束核尾端亚核(Vc)和丘脑的腹后中核(VPM),采用免疫组化和免疫荧光方法观察P2X受体家族(P2X1-7受体)的表达模式。研究结果：实验观察到牙髓炎症第1天,第3天,第7天显示急性牙髓炎症的组织学表现,其中第3天最为典型,而第28天显示牙髓坏死和慢性根尖周炎的组织学表现；P2X1-6受体在Vc和VPM中均表达在神经元的胞浆中,而P2X7表达在Vc和VPM中在小胶质细胞中；P2X2,P2X4和P2X7受体在急性牙髓炎症期在同侧Vc中的表达增加；P2X1-5和P2X7的表达都在双侧VPM中均上升,开髓3d时,对侧VPM中P2X1-5和P2X7的平均表达面积显著高于同侧。研究结论：除P2X6受体持续高表达外,P2X1-5和P2X7受体均可受到牙髓炎症的诱导,在Vc和VPM中表达增高。