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目的:结肠癌是临床上常见的消化道肿瘤之一,好发于50~60岁人群,占所有癌症的第三位。[1,2]随着经济的高速发展,人们的生活水平不断提高,由此带来的饮食结构改变,如少纤维多脂肪,使得该病的发病率在全球范围内呈现逐年升高趋势。[3]目前对于结肠癌的治疗仍以手术作为首选方式,术后或术前结合化学治疗等辅助方法取得一定效果,但是其5年生存率低耐药性强等诸多因素,[4]促使我们亟待寻求更为有效的治疗手段。上个世纪80年代,肿瘤的生物治疗问世,至今已经成为第四种肿瘤治疗方法,而其中的免疫治疗为最常用的方法之一。[5]免疫疗法就是通过增强人体免疫力,调整机体抗瘤能力,达到抑制肿瘤的发生、发展及转移。细胞因子是一类具有多种生物学效应的小分子蛋白,其家族成员很多在肿瘤的发生、发展中起到重要作用,[6]因此细胞因子治疗已成为肿瘤免疫治疗的常用手段之一。IL-17作为Th17细胞的特征性细胞因子,其在肿瘤中的作用引起了我们的兴趣,前期研究结果显示接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠移植瘤体积明显小于接种C26细胞和C26/pc DNA3.1细胞的小鼠移植瘤大小,这说明IL-17可以抑制肿瘤的生长,但是IL-17并不影响各组小鼠的生存期。因此,本研究将对IL-17在结肠癌发生发展中的作用进行深入研究,并探讨其抗瘤机制。方法:1荷瘤小鼠脾细胞亚群分布检测荷瘤小鼠接种肿瘤细胞后35天,取各组小鼠脾脏,利用密度梯度离心法分离脾淋巴细胞,分别提取各组脾淋巴细胞的RNA,Real-Time PCR法检测与各Th细胞相关的特征性细胞因子和转录因子的表达。2 IL-17对肿瘤组织中淋巴细胞浸润情况检测荷瘤小鼠接种肿瘤细胞后35天,取各组小鼠肿瘤组织,甲醛固定后制备蜡块,切片后HE染色法观察接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠肿瘤组织与接种C26/pc DNA3.1细胞和接种C26细胞的小鼠肿瘤组织中淋巴细胞浸润数量的区别。3 IL-17对肿瘤组织中血管密度影响情况检测荷瘤小鼠接种肿瘤细胞后35天,取各组小鼠肿瘤组织,甲醛固定后制备蜡块,切片后免疫组化法标记血管,对比三组荷瘤小鼠肿瘤组织中血管数量。4荷瘤小鼠肿瘤组织中相关细胞因子检测荷瘤小鼠接种肿瘤细胞后35天,Real-Time PCR法和Western blot法检测肿瘤组织中相关细胞因子的表达情况。5荷瘤小鼠肿瘤组织中Th1,Th2,Th17,Treg细胞特征性转录因子的表达情况检测荷瘤小鼠接种肿瘤细胞后35天,分别取各组小鼠肿瘤组织,Real-Time PCR法分别检测Th1、Th2、Th17、Treg细胞的特征性转录因子。6 IL-17对肿瘤细胞凋亡情况研究荷瘤小鼠接种肿瘤细胞后35天,取各组小鼠肿瘤组织,甲醛固定制备蜡块,切片后TUNEL法检测各肿瘤组织中凋亡细胞数量。结果:1 IL-17影响荷瘤小鼠脾细胞亚群分布研究Real-Time PCR法检测结果显示,与接种C26、C26/pc DNA3.1的荷瘤小鼠相比,IL-17可以使接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的荷瘤小鼠脾淋巴细胞中ROR-γt+细胞、IFN-γ+细胞、Th2+细胞和IL-10+细胞细胞增多(P<0.05),同时IL-17+细胞、T-bet+细胞和Foxp-3+细胞的数量减少(P<0.05);接种C26、C26/pc DNA3.1的荷瘤小鼠相比,脾细胞中各细胞因子或转录因子m RNA的水平无统计学差异(P>0.05)。2 IL-17对肿瘤组织中淋巴细胞浸润情况研究HE染色结果显示IL-17可以使小鼠肿瘤组织中淋巴细胞浸润数量明显多于接种C26/pc DNA3.1细胞和C26细胞的小鼠肿瘤组织(P<0.05);接种C26、C26/pc DNA3.1的小鼠肿瘤组织淋巴细胞浸润数量无统计学差异(P>0.05)。3 IL-17对肿瘤组织中血管密度检测免疫组化结果显示IL-17可以使小鼠肿瘤组织中CD34+和Nestin+血管数量多于接种C26/pc DNA3.1细胞和C26细胞的小鼠肿瘤组织(P<0.05);接种C26、C26/pc DNA3.1的小鼠肿瘤组织血管数量无统计学差异(P>0.05)。4荷瘤小鼠肿瘤组织中相关细胞因子检测Real-Time PCR结果显示接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠肿瘤组织比接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠肿瘤组织高表达IL-17、IFN-γ、TGF-β和IL-23 m RNA(P<0.05);同时IL-17可以使接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠肿瘤组织比接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠肿瘤组织低表达IL-4、IL-5、IL-10、IL-12和IL-13 m RNA(P<0.05);接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠肿瘤组织各细胞因子表达情况无统计学差异(P>0.05)。Western blot法结果显示接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠肿瘤组织比接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠肿瘤组织高表达IL-17、IFN-γ蛋白;但是低表达IL-4、IL-5、IL-10、IL-12和IL-13蛋白;接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠肿瘤组织各细胞因子表达情况无明显差异。5荷瘤小鼠肿瘤组织中Th1,Th2,Th17,Treg细胞特征性转录因子的表达情况检测Real-Time PCR结果显示接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠肿瘤组织比接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠肿瘤组织高表达ROR-γt(Th17特征性转录因子)和T-bet(Th1特征性转录因子);但是低表达GATA-3(Th2特征性转录因子)和Foxp-3(Treg特征性转录因子)(P<0.05);接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠肿瘤组织各转录因子表达无统计学差异(P>0.05)。Western blot法结果显示接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠肿瘤组织比接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠肿瘤组织高表达ROR-γt和T-bet蛋白,同时低表达Foxp-3蛋白;接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠肿瘤组织该转录因子表达情况无明显差异。6 IL-17对肿瘤细胞凋亡情况研究TUNEL结果显示IL-17可以使接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠肿瘤组织中凋亡细胞数量明显多于接种C26/pc DNA3.1细胞和C26细胞的小鼠肿瘤组织(P<0.05);接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠肿瘤组织凋亡细胞数量无统计学差异(P>0.05)。结论:1 IL-17基因转染可改变小鼠脾淋巴细胞不同亚群的分布。2 IL-17基因转染可使肿瘤组织中淋巴细胞浸润数量增多。3 IL-17基因转染可使肿瘤组织高表达IFN-γ,但低表达IL-10和IL-13因子,从而发挥抗肿瘤作用。4 IL-17基因转染可使肿瘤组织中血管密度增加。5 IL-17基因转染可使肿瘤组织中凋亡细胞数量增加。