吲哚醌抑制肾癌细胞生长的蛋白质组学研究

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目的:验证2,3吲哚醌对肾癌786-0细胞株有抗增殖、诱凋亡的作用;应用SELDI-TOF-MS技术初步探讨2,3吲哚醌对肾癌786-0细胞株抗增殖、诱导凋亡作用的分子机制;旨在寻找抗肾癌的靶细胞药物及位点。材料和方法:实验所用肾癌细胞为肾癌786-0细胞株。1.增殖抑制实验:本实验采用MTT比色法及普通倒置显微镜下观察法检测细胞增殖活性,以浓度100~800μmol/L2,3-吲哚醌作用肾癌786-0细胞株24~72h后,观察药物对肾癌细胞增殖的影响。2.细胞凋亡实验:本实验采用Hoechst33258荧光染色法观察药物作用后肾癌786-0细胞凋亡的形态学改变。3.差异蛋白实验:实验组和对照组分别提取细胞裂解液,蛋白定量后采用WCX2芯片分析,应用SELDI-TOF-MS技术检测药物作用前后蛋白质表达的差异。结果:MTT比色法证实,2,3-吲哚醌能显著抑制肾癌细胞株786-0的体外增殖,其中在200-800μmol/L呈时间与剂量依赖性;普通倒置显微镜下观察显示药物作用后肾癌细胞株786-0细胞生长缓慢,未见明显增殖;Hoechst33258荧光染色证实,经2,3-吲哚醌作用后的肾癌细胞株786-0细胞核周围出现凋亡小体;应用SELDI-TOF-MS技术检测发现,WCX2芯片共捕获56个蛋白峰,其中药物作用组与对照组之间比较有4个明显的差异蛋白峰,其中在药物组有3个特异性高表达峰,1个特异性低表达峰。对不同浓度药物作用组之间比较,未发现明显的差异蛋白峰,仅发现蛋白峰强度有差别。结论:2,3~吲哚醌对肾癌细胞株786-0细胞具有抗增殖和诱导凋亡的作用,能显著抑制肾癌细胞786-0在体外的生长:2,3-吲哚醌对肾癌786-0细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用与差异表达的蛋白质相关,进一步的提取和鉴定这些差异蛋白质,将为明确其作用的分子机理提供新的思路:SELDI-TOF-MS技术是一项简便,敏感性高,重复性好的用于寻找差异蛋白的方法。
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