论文部分内容阅读
干旱、高温、低温、土壤盐碱化等诸多不利因素是影响植物正常生长、发育的主要原因。柠条锦鸡儿是生长在我国西北部干旱荒漠地区的豆科属锦鸡儿灌木,是一种重要的饲用灌木和植树造林树种。而胚胎发育晚期丰富蛋白LEA就是与植物抗逆密切相关的一类蛋白质,本研究首次从柠条锦鸡儿中克隆得到CkLEA4基因并对其进行表达分析,具体结果如下：1.利用RAC E技术扩增得到该基因的cDNA全长,测序结果表明该基因cDNA长870bp,开放阅读框长510bp,编码169个氨基酸,推测该基因编码的蛋白分子量为17.03KD,等电点为9.3,是一种亲水蛋白。通过序列比对发现该基因属于LEA4基因家族成员,命名为CkLEA4。系统进化分析表明CkLEA4与豆科模式植物蒺藜苜蓿的MtLEA亲缘关系最近,一致性高达85%。2.利用qRT-PCR技术检测发现,经过ABA、NaCl和脱水处理,CkLEA4基因表达量均有提高,表明该基因表达受各种胁迫条件不同程度地诱导。3.构建了p35S::CkLEA4-GFP重组表达载体并转化野生型拟南芥,利用激光共聚焦显微镜观察其亚细胞定位,发现CkLEA4定位在多个细胞器中,具体的位置还需通过后续实验加以验证。4.构建了p35S::CkLEA4-HA过表达双元载体并转化野生型拟南芥,在T3代转基因植物中筛选到8个过表达纯合体株系。对野生型和过表达纯合体株系进行甘露醇、盐和ABA处理,发现转基因拟南芥种子在萌发过程中对甘露醇和盐胁迫抗性增强,并且对ABA的抑制作用不敏感。