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目的：与冠心病相关的危险因素较多，近年来冠心病发病的炎症学说越来越得到重视，革兰阴性菌所致慢性感染及炎症反应可能与动脉粥样硬化的形成有关。感染可引起机体发生固有性免疫应答，进而释放一些炎性因子，如CRP和IL-6等。CD14作为脂多糖(LPS)的受体可介导单核/巨噬细胞、内皮细胞等活化进而促进炎性细胞因子的释放，参与冠心病的发生、发展。很多研究都显示CD14启动子C(-260)T基因点突变和冠心病之间存在一定关系，目前这一基因多态性与冠心病的关系还存在争议，本试验主要通过检测冠心病患者CD14启动子C(-260)T基因点突变情况，同时测定血浆中IL-6与CRP含量，旨在分析这些相关因素与冠心病的关系。从固有免疫的角度探讨冠心病的可能致病机制。
方法：
1标本的收集与处理
收集冠心病(CAD)病人的抗凝血标本115例，平均年龄(62.58±12.73)岁。健康对照标本60例，平均年龄(59.45±12.03)岁。分离血浆与细胞成分，血浆于-86℃保存，供测定IL-6、CRP含量；用盐酸胍法提取血细胞中DNA，-86℃冰冻保存，供CD14启动子基因突变检测。
2测试标本(1)用PCR-RFLP法测试CD14启动子-260位点基因突变：扩增体系为50μl，其中10×Buffer5μl，dNTP(2.5mmol/L)4μl，primerl(20μmol/L)1μl，primer2(20μmol/L)1μl，TaqDNA聚合酶(5U/μl)0.3μl，模板4μl，灭菌三蒸水补至50μl。扩增参数为：预变性94℃5分钟，变性94℃45秒、58℃45秒，延伸72℃1分钟，循环30次，末延伸72℃5分钟。
扩增产物用TAE配制含0.5μg/ml溴化乙啶的2％琼脂糖凝胶电泳，加样5μl/孔，电泳4V/cm，30分钟；PCRMarker作为参照，对扩增产物进行分析。对扩增产物用限制性内切酶(HaeⅢ)酶切：酶切体系为20μl，其中：HaeⅢ(10U/μl)1μl，10×Buffer2μl，DNA扩增产物17μl。37℃水浴反应4小时。酶切结果用3％的琼脂糖凝胶电泳分析。(2)血浆IL-6含量测定：按IL-6ELSA试剂盒说明书。(3)免疫比浊法测定Hs-CRP含量，在全自动生化分析仪上进行。
结果：
1冠心病组、健康对照组CD14启动子C(-260)T基因点突变频率
115例冠心病人中，野生型(CC)为20例，占17.4％；突变杂合子型(TC)为44例，占38.3％；突变纯合子型(TT)为51例，占44.3％。基因频率分别为T为63.5％，C为36.5％。60例健康对照中，野生型(CC)为13例，占21.67％；突变杂合子型(TC)为28例，占46.67％；突变纯合子型(TT)为19例，占31.67％。基因频率分别为T为55.00％，C为45.00％。健康对照组和冠心病组基因型频率(χ2=2.644，p=0.267)、等位基因频率(χ2=2.373，p=0.123)差别无统计学意义。
2血浆IL-6含量测定
115例冠心病人血浆IL-6含量的平均值为32.170±17.377ng/L；60例健康对照组血浆IL-6含量的平均值为24.124±3.107ng/L。二者均值比较差别有显著统计学意义(t=3.553，p＜0.01)。
3冠心病病人不同基因型组血浆IL-6含量比较
在115例冠心病病人血浆中，CC基因型组IL-6平均值为31.309±12.952ng/L，TC基因型组IL-6平均值为33.668±22.201ng/L，TT基因型组IL-6平均值为31.014±13.437ng/L，经Oneway-ANOVA分析，F=0.294，p=0.749，组间无统计学差异。
4血浆CRP含量的测定
115例冠心病人血浆CRP含量的平均值为10.325±12.133mg/L；60例健康对照组血浆CRP含量的平均值为1.488±1.558mg/L。二者均值比较差别有显著统计学意义(t=5.610，p＜0.001)。
5冠心病病人不同基因型组血浆CRP含量比较
在115例冠心病病人血浆中，CC基因型组CRP平均值为12.020±14.662mg/L，TC基因型组CRP平均值为8.046±9.316mg/L，TT基因型组CRP平均值为11.817±12.980mg/L，经Oneway-ANOVA分析，F=1.415，p=0.247，组间无统计学差异。
6冠心病组血浆中CRP与IL-6含量的相关性分析结果
115例冠心病病人中，血浆CRP与IL-6含量的Pearson相关系数r=0.382，p＜0.01。经线性回归分析，二者之间存在直线关系，直线回归方程为：Y=0.267*X+1.7431。
7冠心病病人不同基因型组血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)含量比较
不同基因型组间血浆甘油三酯(TG)(F=1.656，p=0.196)、总胆固醇(TC)(F=0.767，p=0.467)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)(F=0.076，p=0.927)含量比较均无统计学差异。
结论：
1.冠心病组、健康对照组CD14C(-260)T基因频率比较
本研究首次研究了CD14启动子(C-260T)基因在中国北方汉族健康人和冠心病病人中点突变情况。冠心病组基因型突变频率与对照组无统计学差异(χ2=2.644，p=0.267)。T等位基因频率与对照组无统计学差异(χ2=2.373，p=0.123)。
2.冠心病组血浆IL-6水平高于健康对照组(t=3.553，p＜0.01)。
3.冠心病组CD14启动子不同基因型血浆IL-6水平无统计学差异(F=0.294，p=0.749)。
4.冠心病组血浆CRP水平高于健康对照组(t=5.610，p＜0.001)。
5.冠心病组CD14启动子不同基因型血浆CRP水平无统计学差异(F=1.415，p=0.247)。
6.冠心病组血浆IL-6与CRP水平有相关关系，相关系数r=0.382，p＜0.01，经线性回归分析，二者之间存在直线关系，直线回归方程为：Y=0.267*X+1.7431。
7.冠心病组CD14启动子突变不同基因型组间血浆甘油三酯(TG)(F=1.656，p=0.196)、总胆固醇(TC)(F=0.767，p=0.467)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)(F=0.076，p=0.927)含量比较均无统计学差异。