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背景和目的： 动脉血栓性疾病危害大、发病机制复杂，有多种因素参与，动脉粥样硬化是其最常见病因之一。miRNAs及其上游调控因子表达在动脉血栓性疾病中有改变并通过调控靶基因而影响其病程，但具体机制目前尚不完全明确。 本课题将采用miRNA微阵列技术筛选动脉血栓性疾病差异表达miRNAs;通过体内外实验研究差异miRNA调控及相关炎症信号传导通路对THP-1细胞生物学的影响，以更深入了解动脉血栓发生机制，为临床上血栓性疾病的诊治、预后判断提供依据。 实验方法与结果： 第一部分:人动脉血栓相关miRNA差异表达、调控及相关炎症因子对THP-1细胞生物学的影响 方法:应用miRNA微阵列技术筛选动脉血栓性疾病差异表达miRNAs，qRT-PCR进行验证;体外培养THP-1细胞、采用免疫印迹法检测细胞COX-2、p-p38MAPK、p-STAT3蛋白含量，实时荧光定量PCR检测miRNA-146b-3p表达;构建miRNA-146b-3p过表达及抑制慢病毒载体感染THP-1细胞，Western blot检测转染后细胞p38MAPK、COX-2表达量。 结果:①miRNA基因芯片检测，miR-146b-3p、let-7g-3p、miR-4800-3p、miR-345-5p、miR-31-5p在人动脉血栓外周血单核细胞中表达与正常对照组有差异，其中，miR-146b-3p差异表达最大，实时荧光定量PCR检测结果与之相符;②在AngⅡ、IL-6、TNF-α的诱导下，单核细胞COX-2 mRNA、蛋白表达量明显增加;AngⅡ、IL-6可诱导STAT3、p38MAPK磷酸化;IL-6、TNF-α使miR146-b-3p表达增高;③miR-146b-3p下调p38MAPK、COX-2表达。 第二部分:炎症因子在鼠动脉血栓模型中表达及传导机制探讨 方法:利用FeCl3溶液外敷构建大鼠颈动脉血栓模型，光镜下观察组织形态变化，免疫组化观察COX-2的分布;采用ELISA检测鼠外周血AngⅡ、IL-6、TNF-α、TXB2含量;Western blot测定AT1受体阻断剂应用后STAT3、p38MAPK、COX-2蛋白含量改变。 结果:①经FeCl3处理后的血管局部整体形态僵硬，管腔内有暗红色血栓形成。内皮层受损严重，细胞走向紊乱，管腔内出现白细胞浸润;②血管内可见COX-2阳性染色颗粒，多分布于炎性细胞胞质内，随炎性细胞增多染色增强;③动脉血栓模型鼠外周血AngⅡ、IL-6、TNF-α、COX-2表达水平明显升高，STAT3、p38MAPK磷酸化增加，运用p38MAPK抑制剂(SB203580)后COX-2表达下调;④缬沙坦干预后鼠STAT3磷酸化减少、COX-2表达水平下降。 第三部分:高血压患者血栓事件发生的影响因素及相关机制研究 方法:入选原发性高血压患者280例，运用比浊法测定血小板聚集率、ELISA检测外周血AngⅡ、IL-6、TNF-α、COX-2、TXB2含量;Western-blot检测p-STAT3、p-p38MAPK、COX-2蛋白水平;qRT-PCR测定miR-146b-3p表达量。 结果:①AT1R组血浆AngⅡ、COX-2、TXB2水平显著低于non-AT1R，发生动脉血栓事件风险较低(14.29％/32.％);②厄贝沙坦、缬沙坦组血小板聚集率、COX-2、TXB2水平低于氯沙坦组;③动脉血栓患者外周血IL-6、TNF-α水平增高，COX-2、p-STAT3、p-p38MAPK表达增强，miRNA-146b-3p表达下降。 结论： ①血栓形成后单个核细胞大量趋化于损伤血管局部，AngⅡ、IL-6、TNF-α、COX-2等炎性因子表达水平上升，可能与血栓性疾病的发生、发展相关;②动脉血栓形成中存在STAT3信号传导通路激活，并与AngⅡ、IL-6等炎症因子表达增高部分相关;③AT1R拮抗剂可降低高血压患者血浆COX-2、TXB2水平、抑制血小板聚集，从而减少血栓栓塞性事件的发生;不同AT1R制剂作用不完全相同;④miR-146b-3p在动脉血栓性疾病中表达下降，受STAT3调节，并通过MAPK信号传导途径影响下游靶基因COX-2表达。STAT3-miR-146b-MAPK-COX-2信号传导途径在动脉血栓性疾病病程中具有重要作用。