【摘 要】
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植物反转录转座子具有存在广泛、高拷贝数、插入位点专一性等特点,可用于研究植物基因组的组成、表达调控、基因组进化、系统发育及生物多样性等。本研究以茄子(Solanum melo
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植物反转录转座子具有存在广泛、高拷贝数、插入位点专一性等特点,可用于研究植物基因组的组成、表达调控、基因组进化、系统发育及生物多样性等。本研究以茄子(Solanum melongena L.)为试材,克隆茄子反转录转座子的基因片段,能为茄子的基因组研究及基于反转录转座子的分子标记在茄子上的应用创造条件;从PCR反应体系和扩增程序环节对反转录转座子位点间扩增多态性(inter-retrotransposon amplified polymorphism,IRAP)分子标记体系进行优化,建立适合于茄子的IRAP分子标记体系,为茄子亲缘关系分析和基因作图等打下基础。主要结果如下:1.根据马铃薯(Solanum demissum)反转录转座子gag-pol聚合蛋白的部分序列并参考已报道的其它植物反转录转座子结构特征,设计一对引物,从西安绿茄基因组中克隆得到约518bp的片断。通过用GenBank中的BLAST程序分析表明,所克隆的片段与马铃薯反转录转座子gag-pol聚合蛋白90aa~243aa区域氨基酸同源性为43%,据此推断该片段与茄子反转录转座子的gag-pol聚合蛋白编码相关。2.为确保茄子IRAP反应结果的稳定性和重复性,本研究对影响茄子IRAP反应的退火温度、PCR反应循环数、MgCl2、dNTPs、Taq酶、引物、模板浓度等重要因素进行了初步研究。最终优化的茄子IRAP分子标记体系为:20μl反应液中,10×反应buffer(100mmol/L Tris-HCl,100mmol/L KCl,80mmol/L (NH4)2SO4,pH9.0,NP-40)2μl,2mmol/L MgCl2,0.2mmol/L dNTPs,Taq酶l.0U,0.4μmol/L引物,DNA模板50ng。PCR反应程序为:94℃预变性4min,然后按94℃变性30s,45℃退火30s,72℃延伸2min,进行32个循环,最后72℃延伸10min。
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