奶牛健康养殖是中国畜牧业可持续发展的前提。传统奶牛养殖业中，不规范的饲养管理方式使养殖环境不断恶化，导致奶牛乳腺炎发生率不断升高。奶牛乳腺炎是影响奶牛健康养殖的主要疾病，不仅给奶牛养殖业造成巨大的经济损失，还威胁到食品安全和人类健康。为了治疗奶牛乳腺炎，多种抗生素被开发，并成为目前治疗奶牛乳腺炎的主要手段。但是，由于在实际畜牧生产过程中大量且不合理使用抗生素，导致对抗生素具有多重耐药性的菌株不断出现，使奶牛乳腺炎治愈率越来越低。因此，研究奶牛健康养殖，需要研究引起奶牛乳腺炎病原菌耐药性的产生机理。　　金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是引起奶牛乳腺炎的主要病原菌之一，其致病性强，且具有极强的环境适应能力和抗生素耐受性。本课题组前期试验发现，通过对金黄色葡萄球菌野生型菌株BA01611和苯唑西林处理BA01611的转录组测序数据分析，发现3个表达量差异显著的转录因子SarS、SarV和VraR。本研究首先通过qRT-PCR验证与转录组测序结果的一致性；然后，利用基因敲除的方法探究SarS、SarV和VraR对金黄色葡萄球菌表型的影响；最后，本论文还试图找到vraR调控的下游基因。　　主要结果如下：　　1. qRT-PCR与测序结果的一致性检验。分析qRT-PCR的数据发现，与野生菌相比，经苯唑西林处理后，sarS、sarV和vraR的表达量分别为野生菌株表达量的0.56、0.79、15.45倍，与转录组结果一致。　　2.目的基因敲除菌和过表达菌株的构建。本试验利用同源重组的方法，利用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌穿梭载体 pKZ2 ，成功构建了 sarS、sarV和vraR 基因敲除菌BA01611-ΔsarS、BA01611-ΔsarV和BA01611-ΔvraR；以质粒pSE1为基本骨架，成功构建vraR的过表达菌株。　　3. SarS与金黄色葡萄球菌对苯唑西林、万古霉素、替考拉宁的抗性均无关，而SarV、VraR 能够提高金黄色葡萄球菌对苯唑西林和替考拉宁的抗性。SarS 抑制金黄色葡萄球菌的生物膜形成能力，而SarV、VraR与金黄色葡萄球菌的生物膜形成能力无关。SarS、SarV和VraR都能减弱金黄色葡萄球菌的溶血能力，对金葡菌凝固血浆的作用均不明显。　　4.探究了vraR调控的下游基因。通过对实时定量PCR数据的分析发现，甲氧西林抗性基因mecA在BA01611（WT）、 BA01611-ΔvraR和BA01611-ΔvraR-complement三株菌中的表达量无显著差异，表明vraR并不参与mecA的表达调控。进一步分析qRT-PCR 的数据发现，8个基因在mRNA水平的表达量受vraR的调控，这8个基因为：vraX、vraC、vraS、msrR、murA2、mgt、SAOUHSC_01761和SAOUHSC_02101。　　综上所述，本研究利用基因敲除手段，成功构建了sarS、sarV、vraR基因敲除菌，并在此基础上探究了SarS、SarV和VraR对金黄色葡萄球菌表型的影响。此外，还通过qRT-PCR的方法找到8个vraR调控的下游基因，并对这些基因的功能做出分析，为探究金黄色葡萄球菌的耐药机理提供理论基础。