基于代谢组学的脓毒症大鼠血浆代谢物的研究

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研究目的:  脓毒症(Sepsis)是由感染引起的机体生理、生化反应失衡,导致器官功能障碍,甚至严重危及生命。脓毒症时患者存在代谢紊乱,从而导致免疫功能失调、重要脏器受损甚至死亡。本研究主要采用基于气相质谱-色谱(Gas Chromatography-Mass Spectrometry,GC-MS)的代谢组学研究方法对脓毒症大鼠血浆样本进行检测,探究脓毒症时血浆代谢物的变化情况,为发现并找出潜在的生物标志物、早期诊断脓毒症提供有用的新指标,并为后期一系列研究奠定可靠的基础。  研究方法:  本研究通过采用盲肠结扎穿孔(Cecal ligation and puncture,CLP)的方法制备脓毒症大鼠模型,观察脓毒症大鼠的生存率、ELISA法测定血清中炎性因子IL-6和TNF-α水平、HE染色分析肝、肺和肾组织的病理改变来验证模型建立的可靠性。基于GC-MS联用平台对脓毒症大鼠和假手术组大鼠6h的血浆行代谢组学检测,分析脓毒症大鼠血浆代谢物的变化情况。  实验结果:  1、运用盲肠结扎穿孔(CLP)方法建立脓毒症大鼠模型后,ELISA检测脓毒症大鼠血清中TNF-α和IL-6的浓度升高,HE染色显示脓毒症大鼠肝、肺、肾组织出现损伤,提示脓毒症模型建立成功。  2、经代谢组学研究后发现:在造模后6h脓毒症大鼠组血浆内代谢产物发生了明显的变化,通过分析和对比脓毒症组与假手术组之间血浆代谢物的差异,最后得出了27个与脓毒症相关的代谢产物。分别是:邻苯二甲酸、5-羟基吲哚-2-甲酸、核糖醇、5-氨基戊酸、葡萄糖、3-磷酸甘油酸、3-羟基-氨基苯甲酸、2-羟基戊酸、异肌醇、6-羟基乙酸二聚体、2-脱氧季酮酸、4-乙烯基苯酚二聚体、胍基琥珀酸、3-氰丙氨酸、景天庚酮糖、3-羟基吡啶、左旋葡萄糖、二苯乙醇酮、 DL-二氢(神经)鞘氨醇、硫辛酰胺、2-羟基吡啶、花生四烯酸、葡萄糖二酸、N-氨甲酰谷氨酸、腐胺、2-脱氧-D-半乳糖、肉桂酸乙酯。  3、通过对上述27个差异代谢产物进行生物、化学分析,并检索相关文献和相关数据库,构建出了脓毒症代谢通路图,该图提示脓毒症时主要可引起氨基酸、糖类、脂肪等代谢物质的异常,且上述这些代谢产物的异常均与能量代谢、炎症反应和氧化应激有关。  结论:  1、本研究共鉴定出脓毒症相关代谢产物共27个;  2、脓毒症时主要涉及到糖类代谢紊乱、氨基酸代谢紊乱、脂类代谢紊乱等,这些代谢紊乱与能量代谢紊乱及炎症反应有关。
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