【摘 要】
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血栓形成可导致心肌梗塞、中风、肺栓塞等危及生命的疾病,也是外科手术中常见的并发症.初步研究表明中国特有的双胸蚓属蚯蚓体内含有纤溶酶,为了对蚯蚓纤溶酶进行深入研究,利
【出 处】
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中国预防医学科学院 中国疾病预防控制中心
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血栓形成可导致心肌梗塞、中风、肺栓塞等危及生命的疾病,也是外科手术中常见的并发症.初步研究表明中国特有的双胸蚓属蚯蚓体内含有纤溶酶,为了对蚯蚓纤溶酶进行深入研究,利用生物信息学方法,设计引物,通过反转录,获得一种蚯蚓纤溶酶基因,命名为蚯蚓PL<,239>.该基因编码283个氨基酸的前体,成熟肽含有239个氨基酸,与国外从L.rubellus属蚯蚓中获得的纤溶酶基因有很高的同源性.该蛋白属酸性蛋白质,丝氨酸蛋白酶,与人凝血酶、t-PA、u-PA有一定的结构同源性.构象预测显示,PL<,239>蛋白结构的5.0﹪为α螺旋,41.4﹪为β折叠,53.6﹪为噜噗结构,属全β型蛋白质,其立体构象具有典型的蛋白酶结构,是从中国的蚯蚓种属中获得的纤溶酶基因.PL<,239>仅具有一个结构域,具有蛋白酶的特征.为进一步了解PL<,239>的性质,首先将其进行基因工程表达以及了解其生物学活性.为实现重组表达,换用杆状病毒表达系统对PL<,239>进行表达,将PL<,239>结构基因克隆至pFastBacl载体,然后构建重组杆状病毒载体.真核表达系统难于获得较高的表达产量,而且成本较高,因此同时也采用原核表达系统表达PL<,239>蛋白.使用pBV220质粒构建了原核表达载体pBV220-239,并在大肠杆菌中获得表达,表达产生以包涵体形式存在.提取并纯化包涵体,经过变性,凝胶过滤复性和亲和层析纯化,获得的重组产物使用纤维蛋白平皿进行活性测定,可以溶解含有和不含有纤溶酶原的纤维蛋白平皿,表明该蛋白既具有直接纤维蛋白溶解活性,也具有间接纤维蛋白溶解活性.
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