碳青霉烯类药物是治疗多重耐药菌感染的最重要的抗生素之一,碳青霉烯类药物耐药菌的增加给临床治疗带来极大挑战。虽然碳青霉烯类药物禁用于兽医临床,然而近几年国内外学者都从食品动物源肠杆菌中检测到bla_NDM,给人类健康带来严重威胁。本研究从2013²017年连续对安徽某养鸡场产NDM大肠杆菌进行流行性调查,揭示bla_NDM在该鸡场的流行趋势和传播载体特征。采用琼脂稀释法对2013²017年分离自该鸡场的400株大肠杆菌进行药物敏感性实验,结果表明2013²014年未检测到亚胺培南耐药株,2015²017年共检测到18株亚胺培南耐药株,耐药率分别为10.0%、10.5%和4.0%。该鸡场大肠杆菌对四环素、氨苄西林、复方新诺明、链霉素和氟苯尼考耐药率都高于90%,对链霉素（81.4%）、多西环素（84.6%）、环丙沙星（85.3%）和头孢噻肟（88.3%）都表现为高水平耐药,对磷霉素（68.8%）、新霉素（75.3%）、庆大霉素（56.3%）和头孢喹肟（71.1%）耐药率也较高,耐药率低于50%的有头孢他啶（35.8%）、头孢西丁（19.8%）、阿米卡星（22.0%）、黏菌素（28.8%）、安普霉素（43.8%）和亚胺培南（4.5%）。采用PCR和测序的方法对18株亚胺培南耐药大肠杆菌检测bla_NDM基因,结果显示18株耐药菌全部为bla_NDM阳性,包括2株bla_NDM-7和16株bla_NDM-5。同时对bla_NDM阳性菌检测mcr-1、fosA3、floR、rmtB、bla_CTX-M-1G、bla_CTX-M-9G和oqxAB的携带情况。结果显示,oqxAB的检出率为100%（n=18）,mcr-1、fosA3、floR的检出率均为55.5%（n=10）,rmtB检出率为38.9%（n=7）,bla_CTX-M-1G和bla_CTX-M-9G的检出率分别为22.2%（n=4）和27.7%（n=5）。采用多位点序列分型（MLST）和脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法研究NDM阳性菌株的亲缘关系。MLST结果显示,共有8种ST型,2015年分别是ST5442（n=2）、ST10（n=3）和ST2935（n=1）,2016年主要流行ST7507（n=6）,其次为ST156（n=1）和ST93（n=1）,2017年有ST410（n=1）和ST5946（n=3）。PFGE结果显示在鸡场中存在bla_NDM阳性菌克隆传播的现象。采用接合、复制子分型、接合频率计算、质粒稳定性和竞争性实验方法对bla_NDM阳性菌进行bla_NDM基因的水平传播机制和bla_NDM阳性质粒的生物学特征。结果显示,18株bla_NDM基因均可通过接合转移,全部位于可接合的IncX3质粒上,接合频率为6.71×10^-55.75×10^-4。携带bla_NDM质粒在无抗生素的压力下可稳定存在受体菌中,竞争性结果表明获得IncX3质粒具有一定的适应性代价,相对适应度为0.9¹。选取部分NDM阳性菌株进行全基因组测序。结果表明,IncX3质粒骨架与已报道序列相似度为99%。bla_NDM位于两种不同的基因环境中,其中8株为bla_NDM-△ISAba125-IS5-△ISAba125-IS3000-△Tn2,与已报道的人、动物、食品、环境来源携带bla_NDM的IncX3质粒的环境相同,4株为bla_NDM-△ISAba125-IS5-△IS3000-△Tn2。根据PCR mapping检测bla_NDM侧翼序列,6株未全基因组测序大肠杆菌中4株为第一种结构,2株为第二种结构。综上所述,安徽该养殖场鸡源大肠杆菌耐药严重,克隆传播和IncX3质粒的水平传播共同介导bla_NDM在该鸡场的流行,且bla_NDM阳性菌同时携带oqxAB、mcr-1、rmtB和fosA3多种重要耐药基因。携带bla_NDM的食品动物源大肠杆菌可能会威胁人类健康,提示应加强食品动物源大肠杆菌的碳青霉烯类药物耐药性监测。