【摘 要】
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通过PCR从长白猪肝脏染色体DNA中扩增了含猪生长激素基因第一内含子的DNA片段,采用三片段一步连接法将此内含子插入到pGHcDNA的正确位置上,构建成含第一内含子的猪生长激素cD
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通过PCR从长白猪肝脏染色体DNA中扩增了含猪生长激素基因第一内含子的DNA片段,采用三片段一步连接法将此内含子插入到pGHcDNA的正确位置上,构建成含第一内含子的猪生长激素cDNA.利用腺病毒穿梭质粒分别构建了在CMV启动子和MT启动子控制下的pGHcDNA和pGHcDNA-in的4个真核表达载体一.通过在COS7细胞中的暂态表达,经PP95生物活性法测定,证明带有信号肽序列的pGHcDNA和pGHcDNA-in基因均能在培养的真核细胞中进行分泌性表达,表达出的pGH具有生物学活性.利用人类腺病毒载体,通过含pGH基因的穿梭质粒与含腺病毒DNA大片段的pGHGE3质粒在293细胞中的同源重组,分别构建了CMV启动子控制下的pGHcDNA、pGHcDNA-in和gfp基因的重组腺病毒和MT启动子控制下的pGHcDNA重组病毒.将pGH基因重组腺病毒感染CHO细胞,通过ELISA方法检测,证明腺病毒能够介导pGH基因在真核细胞中的表达.通过MTCDrAd感染,在CHO细胞中实现了诱导性表达.经用0.01﹪ZnSO<,4>诱导后72h的测定结果显示,诱导组pGH的表达量比对照组提高了83﹪.结果表明,由腺病毒介导的pGHcDNA基因在大鼠体内经诱导性表达可明显促进大鼠的生长.
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