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啮齿动物螺杆菌(Rodent Helicobacter)属于螺杆菌菌属(Helicobacter),是一群革兰氏染色阴性,微需氧条件生长且营养要求较高的螺旋状细菌。主要以隐性感染形式普遍存在于大鼠、小鼠、沙鼠等啮齿动物的消化道。不同株型的细菌在不同品系、年龄和免疫状态的啮齿动物中可引起宿主不同程度的病理反应从而导致盲肠结肠炎、肝炎、胆囊炎等各种组织炎症甚至恶性肿瘤的发生,其中肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus, H. hepaticus)是目前研究较多的啮齿动物螺杆菌,也是已明确具有致癌原的螺杆菌。动物感染螺杆菌后会改变各种免疫应答参数,干扰试验结果。国外已有大量报道大小鼠种群螺杆菌有很高的感染比例,因此,建立快速诊断方法十分必要。世界各国及国际实验动物理事会已将该类螺杆菌列为啮齿实验动物必须排除的病原微生物,而我国由于缺乏模式菌株和有效的检测方法,至今尚未将其列入实验动物质量国家标准。本研究从小鼠中分离培养了啮齿动物螺杆菌；调查了上海及周边地区实验大小鼠螺杆菌携带情况,为我国实验动物螺杆菌等级及监测标准的制定提供参考和依据；通过原核表达系统制备肝螺杆菌鞭毛蛋白重组抗原,以期作为建立ELISA诊断方法的候选抗原。1.肝螺杆菌的分离、培养及初步鉴定：从经免疫抑制的SPF级C57BL/6小鼠回盲部取材接种哥伦比亚选择性血平皿,将微需氧产气袋置厌氧罐中制造出微需氧环境,37℃培养3～7d,经过形态、生化及PCR扩增16SrRNA基因测序鉴定,呈现肝螺杆菌的典型生物学特性,与GenBank库中H.hepaticus16SrRNA(emb|AJ007931.1)基因序列进行比对,同源性达到98%,成功分离到一株H. hepaticus。2.上海及周边地区实验大小鼠螺杆菌携带情况调查：用PCR法测得实验大鼠阳性率为70.3%(71/101),其中清洁级、SPF级分别为69.6%(48/69)和71.9%(23/32)；实验小鼠阳性率为35.8%(126/352),其中清洁级、SPF级阳性率分别为51.5%(52/101)和29.5%(74/251);ELISA法测得实验大鼠阳性率为52.7%(87/165),其中清洁级、SPF级分别为53.6%(45/84)和51.9%(42/81)；实验小鼠阳性率为15.9%(14/88),其中清洁级、SPF级分别为19.2%(5/26)和14.5%(9/62)。用五种啮齿动物螺杆菌特异性16SrRNA基因引物进一步分析,结果显示在携带螺杆菌的107只小鼠及68只大鼠中,主要携带的是H.rodentium、H. hepaticus和H. bilis三种。上述数据表明上海及周边地区实验大小鼠中皆存在不同程度的螺杆菌感染。3.肝螺杆菌flaB基因的表达、纯化和抗体制备：根据GenBank公布的Hh ATCC51449flaB基因序列(NC004917.1),人工合成flaB全基因序列,PCR扩增后将目的片段插入pGEM-T载体,并测序鉴定。目的条带亚克隆于原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-flaB,转化E.coli BL21(DE3), IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,结果显示融合蛋白约54KDa,以可溶性形式存在。经Ni-NTA Agarose柱纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗重组flaB蛋白血清,采用Hh全菌抗体的Western blot和鼠抗重组flaB蛋白血清的间接ELISA试验鉴定重组蛋白的免疫反应性和抗原性。实验结果表明,成功构建HhpET-flaB高效原核表达系统,所表达的重组flaB蛋白有良好的免疫反应性和免疫原性,可作为建立Hh ELISA诊断方法的候选抗原。