研究背景：原发免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenic,topenic,ITP)是一组免疫介导的血小板过度破坏所致的出血性疾病。临床主要表现为自身免疫性小板减少,伴或不伴皮肤黏膜出血。大量研究表明,ITP是一种异质性疾病,血小板自身抗原免疫失耐受致使血小板特异性抗体介导的血小板破坏,细胞毒性T细胞(CTL)介导的血小板溶解,以及巨核细胞凋亡障碍引起的血小板生成不良都是其发病的重要机制。近年来,Th细胞介导的细胞免疫逐渐成为ITP发病机制研究的热点。Thl细胞可以活化巨噬细胞,分泌干扰素-γ(IFN-γ)、IL-2等细胞因子。目前认为,Th1细胞在ITP发病机制中为优势反应细胞,其与Th2细胞的失衡可是ITP发病的重要原因之一。Th17细胞是近年来新发现的辅助性T淋巴细胞亚群。研究发现,Th17细胞在多种自身免疫性疾病中发挥重要作用。其中,Th17比例在ITP病人体内显著升高被大量证实。Th17细胞亚群分泌的细胞因子IL-17亦与ITP的发生发展有关。近来,一系列研究发现,一个特定的T细胞亚群可直接分泌IL-9,即Th9细胞。IL-9被认为是调节自身免疫性疾病的炎症和高反应性的一种新的治疗靶向,而Th9的异常活化及异常分泌IL-9可能与ITP的发病机制有关。IL-9的产生被多种细胞因子及转录因子调控,包括PU.1(由Spil编码),STAT6,Batf,GATA.3和IRF4等。其中PU.1是ETS家族中最重要的转录因子,可直接与119启动子结合,并与组蛋白乙酰基转移酶GCN5形成复合物,从而活化Il9启动子。与Th9的表型相关联的组蛋白修饰已被证明依赖于PU.1,这表明PU.1可能通过调控Th9的分化参与ITP的发生发展。目的：本研究拟通过检测ITP患者外周血的Th1/Th17/Th9细胞亚群比例及各细胞因子含量,通过比较Th1/Th17/Th9细胞亚群在ITP发病中的相关性,进一步探讨Th9细胞在ITP发病机制中的意义,并明确PU.1在IL-9产生中的作用。材料和方法：(1)实验组及正常对照组：本实验共选取2014年3月至2015年1月在山东大学齐鲁医院血液科门诊及新住院新确诊的ITP患者34例,其中男性患者15例,女性患者19例,年龄为18～56岁。其诊断均满足美国血液病协会2011年自身免疫性血小板减少症循证实践指南诊断,且未经药物及输血治疗。同时随机选入34例健康者设为正常对照组,其中男性13例,女性21例,年龄为26-63岁。所有受试者均无自身免疫性疾病、高血压、糖尿病、心血管疾病、妊娠、恶性肿瘤等其他疾病,且一个月内未使用糖皮质激素等免疫抑制剂。(2)应用流式细胞术检测ITP患者和正常对照组外周血中Th1、Th17和Th9细胞亚群比例。三种细胞分别标记为：Thl细胞为CD3+CD8--IFN-γ+,Th9细胞为CD3+CD8--IL-9+,Th17细胞为CD3+CD8--IL-17+;(3)应用酶联免疫吸附技术(ELISA)检测ITP患者以及正常对照组血浆中细胞因子IFN-γ、IL-17和IL-9的浓度；(4)应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测IL-9 mRNA和PU.I mRNA的表达水平。结果：(1)ITP患者外周血Thl细胞比例(18.23±2.48%)明显高于正常对照组(12.46±2.72%)(p<0.05)。(2)ITP患者外周血Th17细胞比例(1.844±0.43%)较正常对照组(1.21±±0.38%)亦升高(p<0.05)。(3)ITP患者外周血Th9细胞比例(1.13±0.32%)高于正常对照组(0.29±0.08%)(p<0.05)(4)ITP患者血浆中IFN-y表达水平(32.52±±10.28pg/m1)较正常对照组(17.83±8.02pg/ml)显著升高,ITP患者血浆和正常对照组血浆中IL-17、IL-9表达水平均低于ELISA试剂盒最低检测浓度,无法进行统计学分析。(5) IL-9 mRNA在ITP患者外周血中表达水平比正常对照组明显升高,PU.I mRNA表达亦明显升高,两者呈正相关性；(6)ITP患者外周血中Th9细胞亚群和Th17细胞亚群呈正相关(r=0.5614,p=0.0192)。(7)在ITP患者外周血中,Th9细胞亚群与Thl细胞亚群呈正相关性(r=0.4640,p=0.0258),同时Th17细胞亚群与Thl细胞亚群亦呈明显正相关(r=0.6213,p=0.0087)结论：Thl细胞在ITP免疫应答反应中呈优势反应,Th9细胞亚群比例增加可能是促进ITP发生发展的一个重要因素,其与Th1、Th17细胞亚群多效性的相互作用和影响可能是导致ITP发病的一个重要的决定因素。而PU.1作为调控Th9细胞分化及分泌IL-9的关键转录因子也发挥了重要作用。因此,PU.1可以作为治疗ITP的新靶点以平衡三种细胞亚群。