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当今,卵母细胞体外成熟培养技术虽然取得了很大的进展,但是体外成熟卵母细胞的质量还是不如体内成熟的卵母细胞,其质量直接影响着体外受精、核移植、转基因等现代胚胎生物工程的进展。在卵母细胞上成熟调控机制还处于研究阶段,尤其是在分子层面上的成熟机制还不是很清楚。本研究运用mRNA差异显示技术(differential display reverse transcription polymerase chain reaction,DDRT-PCR)对猪的卵母细胞体外成熟前后差异表达的基因进行初步研究,以便更清晰地了解猪卵母细胞成熟的分子机制,为猪卵母细胞体外成熟制定更完善的培养体系。
本研究以3条锚定引物和3条随机引物,对猪卵母细胞成熟前后差异表达的基因进行PCR扩增,PCR产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染后,从凝胶回收得到了20条差异表达条带,其中14条在第二次PCR扩增反应中得到重扩增,12条重扩增后的条带得到成功克隆,7条克隆成功的条带测序成功。经BLAST软件在GenBank中比对,发现差异条带11、12和SH3GLBl(SH3-domain GRB2-1ike endophilin Bl)基因具有较高的同源性,预测其功能是维持卵母细胞内线粒体的正常形态,抑制线粒体途径的细胞凋亡;差异条带15和LGALS3(lectin galactoside-bindingsoluble3)基因具有较高的同源性,LGALS3为抗凋亡基因;差异条带16、17和PHF13(finger protein13)基因具有较高的同源性,其功能与卵母细胞成熟过程中的基因转录调控和染色质结构的调控有关;差异条带19和AVEN(Cell death regulator Aven)基因具有较高的同源性,AVEN为抗凋亡基因。标号为19的差异基因(与AVEN基因具有较高的同源性)在卵母细胞成熟前表达,成熟后消失;标号为11和12的差异基因(与SH3GLB1基因具有较高的同源性)、标号为15的差异基因(与LGALS3基因具有较高的同源性)、标号为16和17的差异基因(与PHF13基因具有较高的同源性)在卵母细胞成熟后(有第一极体排放和无第一极体排放)特异表达。标号为4的差异片段在GenBank没有找到同源相似基因,推测可能是新基因。