【摘 要】
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小油桐是一种可以生产生物柴油的能源植物,以小油桐的成熟种子子叶为外植体,建立了简单、有效、可重复的小油桐植株再生与转化方法。进行植株再生的培养基由MS基础培养基和不
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小油桐是一种可以生产生物柴油的能源植物,以小油桐的成熟种子子叶为外植体,建立了简单、有效、可重复的小油桐植株再生与转化方法。进行植株再生的培养基由MS基础培养基和不同浓度的6-BA(0.5,1.0,2.0,3.0,4.0 mg/L)和IBA(0.01,0.1,0.5,1 mg/L)组成。将已制备好的子叶外植体接种在不同的植株再生培养基中培养,结果表明:子叶外植体在MS附加3.0 mg/L6-BA和0.01 mg/L IBA的培养基(以后称之为MS1)中有较高的愈伤和再生芽率。经过2周的培养,愈伤诱导率可达到100％；经过8周的培养,平均最高的再生芽诱导率为62％。将已长至1.5-3 cm的再生芽转移志生根培养基(1/2 MS附加0.3mg/L IBA)中,经过4周的培养,可获得平均45.3％的生根率。生根的再生小植株能够移栽至土壤中成活。
进行遗传转化的农杆菌菌株为LBA4404,该菌株包含双元载体pCAMBIA2301,载体上有β-葡糖苷酸酶(GUS)基因和编码抗卡那霉素的nptⅡ基因,35S启动子用来启动GUS和nptⅡ基因的表达。农杆菌侵染后的子叶外植体置MS1共培培养基暗培养3天后,置愈伤诱导培养基(MS1+300 mg/L头孢霉素),诱导产生的愈伤接入芽诱导培养基(MS1+100 mg/L头孢霉素+20mg/L卡那霉素),具有卡那霉素抗性的再生芽在生根培养基(1/2 MS+0.3mg/LIBA+100 mg/L头孢霉素+20 mg/L卡那霉素)上诱导生根。结果表明,转化后获得的抗性再生芽GUS阳性率为30％,PCR和Southern blot结果进一步证实了GUS基因的成功转化,并且稳定地整合在小油桐再生植株的基因组上。
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