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目的：阐明microRNA-135b(miR-135b)对Ⅰ型糖尿病大鼠肠系肺动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(Large-conductance Ca2+-activated K+ channel,BKCa)调控作用。
方法：酶解法分离肠系膜动脉平滑肌细胞;Luciferase技术检测miR-135b对BKCa通道β1亚单位基因(KCNMB1)表达的调控:qRT-PCR技术检测KCNMB1mRNA的表达;免疫荧光和Western blot技术检测Kca通道β1亚单位蛋白的表达。
结果:1、Luciferase结果显示miR-135b对KCNMB1有明显的调控作用(P＜0.01)。2、与对照组比较,miR-135b降低了肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa的β1亚单位蛋白表达量(P＜0.05);而miR-135b抑制分子(AMO-135b)能够逆转miR-135b所导致的β1亚单位蛋白表达的降低。3、与对照组比较,高糖组BKCa的β1亚单位蛋白表达量降低(P＜0.05)。4、miR-135b和高糖培养均能降低KCNMB1 mRNA的表达(P＜0.01)。
结论：Ⅰ型糖尿病大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa的β1亚单位蛋白表达量减少;miR-135b在mRNA水平降低了KCNMB1;miR-135b抑制BKCa通道β1亚单位蛋白表达。