本研究的目的是先进行马铃薯卷叶病毒(PLRV)外壳蛋白(CP)基因酵母与原核表达效果的比较，获得大量重组CP，然后以重组CP为抗原制备特异性抗血清、获得多克隆抗体与酶标记抗体，为进行PLRV的DAS-ELISA检测试剂盒的制备奠定基础。主要研究结果如下:　　 1、以lacZ为标记基因、INVScl为受体菌研究了酿酒酵母表达系统的有效性。用LIAc法获得了转化子，于30℃经2％半乳糖诱导16h～32h实现了lacZ的高水平表达。用酸洗玻璃珠法提取酵母蛋白，以X-gal为底物可方便地检测lacZ表达产物的活性，经改进在酶标板反应孔中可对多个样品的β-半乳糖苷酶活性进行快速检测。　　 2、构建了PLRV-CP基因与PLRV缺失突变CP基因的酿酒酵母表达载体，并进行了基因表达的诱导。以pYES2.1/V5-His/-TOPO为起始载体，构建了PLRV-CP基因(624bp)的酵母表达载体pYES-LRCP，工程菌株INVSc1(pYES-LRCP)经半乳糖诱导后，SDS-PAGE图谱上没有预期的表达蛋白。用PLRV缺失突变CP基因(498bp)的PCR产物与pYES2.1/V5-His/-TOPO连接构建了突变基因的酵母表达载体pYES-LRCP-126，DNA测序结果确认了表达载体的正确性。在30℃，工程菌株INVSc1（pYES-LRCP-126）经2％半乳糖诱导培养16h，SDS-PAGE显示蛋白图谱上有一条23kDa的特异性蛋白条带，其大小与预期的重组CP相符。该表达蛋白呈水溶状态，但表达量较低。　　 3、通过原核表达获得了大量PLRV的重组CP。用本课题组构建的PLRV缺失突变CP基因的原核表达载体pBAD-LRCP-126转化受体大肠杆菌TOP10，工程菌株TOP10(pBAD-LRCP-126)经0.2％阿拉伯糖诱导获得了基因的高效表达，提取菌体总蛋白后经镍离子亲和层析获得了大量高纯度的PLRV重组CP。　　 4、制备了PLRV重组CP的特异性抗血清。用纯化的重组CP作抗原免疫家兔获得了抗血清，间接ELISA定显示效价可达1∶12800。　　 5、获得了重组CP的多克隆抗体(IgG)与酶标记抗体(IgG-AP)。先用饱和(NH4)2SO4　　 进行盐析，然后用ProteinG亲和层析柱纯化，获得了高纯度的抗体(IgG)。用戊二醛一步法对纯化的抗体进行标记，获得了IgG的碱性磷酸酶标记物(IgG-AP)。　　 6、进行了PLRV的DAS-ELISA检测。用制备的IgG与酶标抗体(IgG-AP)对感染PLRV的叶片进行检测，反应呈阳性，健康的叶片则呈阴性，结果表明获得了PLRV的特异性多克隆抗体与酶标记抗体。　　 本研究为通过基因工程途径大量制备PLRV重组CP，获得抗体、酶标抗体及组装DAS-ELISA试剂盒奠定了基础。