木蓝属七种植物的核型分析和微卫星引物开发

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kyl1n
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本文采用根尖压片法对豆科(Fabaceae)木蓝属(IndigoferaL)植物的7个种:多花木蓝Indigofera. amblyantha Craib、河北木蓝I.bungeana Walp.、滇木蓝I.delavayi Franch、腺毛木蓝I.scabrida Dunn、四川木蓝I.szechuensis Craib、刺序木蓝I.silvestrii Pamp.和尖叶木蓝I.zollingeriana Miq.的染色体数目和核型进行了研究。结果表明:除了尖叶木蓝染色体数目为2n=4x=32(四倍体),其余6种木蓝的染色体数目均为2n=2x=16(二倍体)。尖叶木蓝和刺序木蓝核型分类为2A型,其余5种木蓝的核型均为1A型。供试种主要包含中部着丝点区染色体。滇木蓝、腺毛木蓝、刺序木蓝、四川木蓝和尖叶木蓝的核型分析为首次报道。   利用了磁珠富集文库的方法来开发SSR引物。采用高效的微卫星分离策略:将基因组DNA酶切,再进行选择性扩增得到AFLP-DNA;然后用生物素化的探针(AC)15,(GA)15,(AAG)8与其混合变性杂交,得到的片段与包被在磁珠表面的链霉亲和素(streptavidin)结合,经过一系列洗涤后,非特异性引物被洗掉,含有SSR的片段再通过PCR恢复双链,将这些片段连接到T载体上,并转化入感受态细胞。经PCR法检测,最后对150个克隆进行测序,得到80条含微卫星的序列。分析微卫星种类,其中(CA/GT)n比例最高,并发现三碱基重复微卫星(AAG)n、(CTT)n。利用软件Primer5.0,对从木蓝富集文库中筛选得到的30个微卫星序列进行引物设计。用木蓝属植物的20个体进行初步检测。结果表明:采用磁珠富集法通过建库分离木蓝微卫星序列获得了不错的效果,为进一步从木蓝中分离大量的微卫星标记提供了可靠的试验方法。
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