人脐带间充质干细胞移植改善围绝经期大鼠卵巢储备功能的持续时间及其可能途径

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【目的】  1.应用人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)经尾静脉移植到围绝经期大鼠,观察其对卵巢储备功能的影响及其持续时间。  2.探讨hUCMSCs移植是否通过旁分泌途径影响围绝经期大鼠卵巢储备功能。  3.探讨hUCMSCs移植是否通过P450arom途径影响E2的生物合成。  4.探讨hUCMSCs移植是否通过下丘脑-垂体ER-α途径影响HPO轴调节功能。  【方法】  阴道脱落细胞涂片法监测大鼠动情周期,筛选出30只月龄12~14个月的SPF级围绝经期SD大鼠模型,随机分为A组、B组(15只/组);同时选取15只3-5月龄青年雌性SD大鼠作为C组,所有围绝经期与青年SD大鼠生活条件及喂养方式相同。A组经尾静脉移植细胞缓冲液(PBS液)1ml,隔日一次,共2次;B组经尾静脉移植浓度为1×106细胞/ml的hUCMSCs单细胞悬液1ml,隔日一次,共2次;C组不予处理。于移植前、移植后14d、21d、28d采用ELISA法检测各组大鼠血清E2、AMH、FSH水平,并观察大鼠卵巢结构及卵泡计数的变化;采用PCR法检测hUCMSCs中HGF、VEGF、IGF-1基因及蛋白表达情况;采用免疫组化及western blot法检测卵巢HGF、VEGF、IGF-1、P450arom表达变化;采用免疫组化法检测大鼠下丘脑及垂体ER-α表达变化。  【结果】  1. hUCMSCs移植并不引起SD大鼠移植排斥反应。  2. hUCMSCs移植后14d、21d、28d,B组大鼠血清E2、AMH均较移植前及A组升高(P<0.05),FSH较移植前及A组降低(P<0.05);hUCMSCs移植后大鼠卵巢结构改善,各级卵泡数明显增加(P<0.05)。  3. hUCMSCs有HGF、VEGF、IGF-1基因及蛋白表达。  4.末次移植后14d、21d、28d,B组大鼠卵巢HGF、VEGF、IGF-1、P450arom表达及下丘脑-垂体ER-α表达与A组相比均明显升高(P<0.05)。  【结论】  1. hUCMSCs移植可改善围绝经期大鼠卵巢储备功能,且至少持续至移植后28d。  2. hUCMSCs移植后可能通过分泌HGF、VEGF、IGF-1影响围绝经期大鼠卵巢储备功能。  3. hUCMSCs移植可能通过促进围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶的表达提高E2水平。  4. hUCMSCs移植可能通过提高围绝经期大鼠下丘脑-垂体ER-α表达改善HPO轴调节功能。
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