肝脏的重要性以及肝脏相关疾病的危害性使得肝组织工程迅速发展。本论文以肝组织工程做为大背景，考虑到种子细胞在体外培养过程中，时间一久便会逐渐老化，丧失其特有的功能，从而难以获得组织工程所需的大量细胞，因此本实验室尝试研究抗细胞衰老问题。　　 本研究预想结合肝组织工程的三要素:种子细胞，三维支架与生长因子。但因实验过程中发现三维研究就目前实验室的条件和技术而言是较困难的，所以先从二维水平入手研究抗细胞衰老。以后再过渡到三维层面的研究。本研究的种子细胞选用的是人肝星状细胞HSC，二维培养条件是参照相关资料所选定的三种带不同电荷的电性材料(分别为带负电荷的聚丙烯酸PAAc，电中性的聚乙烯乙二醇PEG，带正电的聚丙烯胺PAAm)，生长因子选用的是胰岛素类生长因子(IGF)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)。　　 本实验采用光化学固定法在24孔聚苯乙烯(PSt)培养板上接枝三种不同电性的材料，在准备好二维培养条件之后，每种电性材料都设置三个组别，分别为空白组(control)、游离组(Free)、共固定组(Co-immobilized)。空白组即对照组，游离组是向HSC细胞悬液中加入剂量为20ng/well的游离状态IGF及TNF-α，共固定组是在电性材料上接枝光活性TNF-α/IGF(剂量亦为20ng/well)，经过紫外照射后便成为共固定的生物材料，然后在其上接种HSC细胞悬液进行48h培养。　　 本研究分成三大部分，首先是材料表征，在光化学固定的生物材料(即AzPhPAAc、AzPhPEG、AzPhPAAm)和生长因子(即AzPhIGF、AzPhTNF-α)制备好之后，用傅里叶变换红外光谱法、X-射线光电子能谱检测法、原子力显微镜检测法、扫描电子显微镜等检测方法检验其合成情况。　　 在确定光化学固定的生物材料合成成功之后，我们接下来在细胞层面研究生长因子对HSC的抗细胞衰老作用。经过生长因子的剂量筛选实验、DAPI染色法、衰老试剂盒β-半乳糖苷酶检测法、流式检测细胞周期的实验，我们发现共固定组相对游离组、空白组而言，能最大程度抑制HSC细胞衰老。　　 接着，我们进行了第三部分的研究，即在分子层面研究生长因子对人肝星状细胞HSC的抗细胞衰老作用。通过免疫印迹、流式检测衰老相关蛋白表达量（如Rb蛋白及p53蛋白）的方法来进一步证明固定组确实能最大程度的地抑制HSC细胞的衰老（相对游离组、空白组而言）。亦会以免疫荧光的方式检测磷酸化Rb蛋白在人肝星状细胞HSC中的定位。　　 本研究共得出以下结论:首先，表征数据证明光化学固定的三种不同电性的生物材料制备成功。其次，共固定组上接种的HSC细胞的存活率比空白、游离组要高，且存在显著性差异。共固定组生长因子的最适剂量为IGF及TNF-α均10ng。第三、DAPI数据表明固定组上接种的HSC细胞相对空白及游离组，其生长状态更加良好:折光度好、胞浆内颗粒物质少、细胞生长均匀;衰老β-半乳糖苷酶数据表明共固定组的阳性细胞数量少于空白、游离组，从而说明该组能最大程度抑制HSC细胞衰老。此外，流式细胞仪检测HSC细胞周期的数据表明共固定组上接种细胞的G1期阻滞最少（相对空白、游离组），进一步验证该组最能延缓细胞衰老。最后，流式检测衰老相关蛋白表达量的数据表明固定组细胞的p53及Rb蛋白（均为衰老正相关蛋白）表达量最低，空白组的表达量最高，从蛋白层面证明了上述结论。